淮安取样流程.docx

,开展 1:1 配对病例对照研究的问卷调查 3. mRNA 定量分析,初步探讨表达水平差异的可能机制 、等位基因多态、表达水平与食管癌发病风险的关系, 1. 研究对象:在江苏省淮安市楚州区食管癌高发区人群中进行 1:1 配对病例- 对照研究。 病例现在:经病例或内窥镜诊断明确的原发性食管癌患者,未经放、化疗治疗 对照选择:按1:1配对原则,按照年纪相差±5岁、性别、民族、籍贯匹配,选择除消化系统疾病以外的社区健康个体作为对照人群 :收集符合入选条件的病例和对照个 200 例。 3. 流行病学调查:回顾性问卷询问的方式进行调查,调查表包括病例的病例类型和病例分期:病例和对照的一般情况、居住情况、个人生活习惯、饮食习惯、饮酒、饮茶、饮水情况、既往病史和肿瘤家族史。 :收集肿瘤患者新鲜手术组织,包括癌组织和远端癌旁组织个 2块, 分别立即投入 RNAstore 储存液,4℃保存不超过 12h ,分离血浆和淋巴细胞, 随后依次分别分离 RNA 、 DNA 和总蛋白。对照人群仅采集肝素抗凝全血 5ml , 处理同前。 5. 基因遗传多态性分析:盐析法提取 DNA , PCR-RFLP 和 diASA-AMP 法检测 CYP2E1 、 NQO1 、 GSTM1 、 GSTT1 、 MTHFR 、 MGMT 、 1 、 XPD 、 GSTP1 、 H hOGG1 等基因的遗传多态性。 6. 基因表达水平的检测:自组织和分离的淋巴细胞提取总 RNA ,逆转录为 cDNA , 应用实时荧光定量 PCR 技术对 CYP2E1 、 NQO1 、 GSTP1 、 MTHFR 、 MGMT 、 hOGG1 、 1 、 XPD 、 hMLH1 、 hMSH2 等相关基因进行基因表达水平的检测。 Western blotting 分析: 自组织和分离的淋巴细胞提取总蛋白,应用 Western blotting 技术对相关蛋白进行检测。 8. 资料的统计分析:用 SAS 软件, 进行单因素分析和多因素条件 Logistic 回归, 建立食管癌发病风险模型,确定相应因素的归因危险分析,提出降低食管癌发病风险的卫生策略。→按配对条件匹配对照→问卷调查→采集组织和肝素抗凝全血 5ml →提取 RNA 、 DNA 和总蛋白→进行等我基因多态、 mRNA 表达和蛋白的 Western blotting 分析→结合环境危险因素和肿瘤家族史,应用 SAS 统计软件分析环境及遗传易感性在淮安地区食管癌发病中的作用收集食管癌新发病例按配对条件匹配对照问卷调查癌组织和癌旁组织各 2块外周血 5ml RNA 提取 D NA 提取蛋白提取环境危险因素分析基因表达分析基因序列变异分析基因功能分析食管癌相关 biomarks : 1. 收集病例及对照