蛋白质的性质实验(一).doc

.
实用文档.
蛋白质的性质实验〔一〕
蛋白质及氨基酸的呈色反响
　　一、目的
　　1．了解构成蛋白质的根本结构单位及主要连接方式。
　　2．了解蛋白质和某些氨基酸的呈色反响原理。
　　3．学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。
　　二、呈色反响
　　〔一〕双缩脲反响
　　1．原理
　　尿素加热至180℃左右，生成双缩脲并放出一分子氨。双缩脲在碱性环境中能与Cu2+结合生成紫红色化合物，此反响称为双缩脲反响。蛋白质分子中有肽键，其结构与双缩脲相似，也能发生此反响。可用于蛋白质的定性或定量测定。
　　双缩脲反响不仅为含有两个以上肽键的物质所有。含有
　　一个肽键和一个—CS—NH2，—CH2—NH2，—CRH—NH2，—CH2—NH2—CHNH2—CH2OH或—CHOHCH2NH2等基团的物质以及
一切蛋白质或二肽以上的多肽都有双缩脲反响，但有双缩脲反响的物质不一定都是蛋白质或多肽。
　　2．试剂
　　
　　3．操作
　　取少量尿素结晶，放在枯燥试管中。用微火加热使尿素熔化。熔化的尿素开始硬化时，停止加热，尿素放出氨，形成双缩脲。冷后，加10％氢氧化钠溶液约1mL，振荡混匀，再加1％硫酸铜溶液1滴，再振荡。观察出现的粉红颜色。要防止添加过量硫酸铜，否那么，生成的蓝色氢氧化铜能掩盖粉红色。
　　向另一试管加卵清蛋白溶液约1mL和10％氢氧化钠溶液约 2 mL，摇匀，再加1％硫酸铜溶液2滴，随加随摇。观察紫玫瑰色的出现。
.
实用文档.
　　〔二〕茚三酮反响
　　1．原理
　　除脯氨酸、羟脯氨酸和茚三酮反响产生黄色物质外，所有α-氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反响生成蓝紫色物质。
　　β-丙氨酸、氨和许多一级胺都呈正反响。尿素、马尿酸、二酮吡嗪和肽键上的亚氨基不呈现此反响。因此，虽然蛋白质和氨基酸均有茚三酮反响，但能与茚三酮呈阳性反响的不一定就是蛋白质或氨基酸。在定性、定量测定中，应严防干扰物存在。
　　该反响十分灵敏，1∶1500000浓度的氨基酸水溶液即能给出反响，是一种常用的氨基酸定量测定方法。
　　茚三酮反响分为两步，第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛，水合茚三酮被复原成复原型茚三酮；第二步是所形成的复原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。
　　此反响的适宜pH为5～7，同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH条件下的颜色深浅不同，酸度过大时甚至不显色。
　　2．试剂
　　
　　3．操作
　　〔1〕取2支试管分别参加蛋白质溶液和甘氨酸溶液mL，再各加％茚三酮水溶液，混匀，在沸水浴中加热1～2分钟，观察颜色由粉色变紫红色再变蓝。
　　〔2〕在一小块滤纸上滴一滴％甘氨酸溶液，风干后再在原处滴一滴％茚三酮乙醇溶液，在微火旁烘干显色观察紫红色斑点的出现。
　　〔三〕黄色反响
　　1．原理
　　含有苯环结构的氨基酸，如酪氨酸和色氨酸，遇硝酸后，可被硝化成黄色物质，该化合物在碱性溶液中进一步形成深橙色的硝醌酸钠。反响式如下：
　　多数蛋白质分子含有带苯环的氨基酸，所以有黄色反响，苯丙氨酸不易硝化，需参加少量浓硫酸才有黄色反响。
　　2．试剂
　　〔1〕鸡蛋清溶液 100 mL
.