primerpremier5使用详解.doc

primerpremier5使用详解
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２.  安装好以后就会在程序中双击打开.
     开始设计克隆目的基因的引物。
ﻫ打开后的界面如图。点—DＮＡ SＥQUＥNCE如图所示。
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输入目的基因片段，可以复制后用ctｒl＋V键拷贝到栏内,后应加数个N以备后续设计时加酶切位点及保护碱基，如图所示。
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ﻫ选中enzyme图标，将所选质粒上的多克隆酶切位点加入左栏
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选中OK键，分析目的基因中所含的酶切位点,选插入位点时就应排除这些酶
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选中primeｒ图标,点S图标，ｅｄit　primeｒ，开始设计正义链。
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软件默认引物为二－五个碱基
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可将鼠标点在设计框的3端从右向左删除7-9个碱基,保留16—１8个配对即可 
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在引物的5端加入选好的酶切位点并在其左侧加３个保护碱基，入该图加入ＨIND III酶切位点及ＴTA保护碱基,完成后点anaｌyze,认为可以后点OＫ。
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选中左上角A图标，用鼠标拉动滑块将待选引物放至目的基因末端。如图，选中EDIＴ　PRIMEＲS图标,开始设计反义链。
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从３端删除7-9个碱基同正义链。
ﻫ将酶切位点加在5端，应将产品目录所示的酶切位点序列从右至左加入(注意不要加反）如图加入BaｍH ，认为可以后点OＫ。ﻫ