食品微生物检验方法.ppt

食品微生物检验方法
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内容提要
菌落总数检测
大肠菌群及大肠杆菌检测
金黄色葡萄球菌检测
沙门氏菌检测
单核细胞增生李斯特氏菌检测
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菌落总数测定——菌落总数的概念
菌落总数是指在被检样品的单位重量（g）、容积（ml）或表面积（cm2）内，所含能于某种固体培养基上，在一定条件下培养后所生成的菌落的总数。
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菌落总数测定——卫生学意义
判定食品被细菌污染的程度及卫生质量。
及时反映食品加工过程是否符合
卫生要求，为被检食品卫生学评
价提供依据。
通常认为，食品中细菌数量越多，
则可考虑致病菌污染的可能性越
大，菌落总数的多少在一定程度
上标志着食品卫生质量的优劣。
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FDA BAM 菌落总数测定流程
检样xg/mL+9xml稀释液（磷酸盐缓冲液）
适当十倍稀释样品
选择2~3个连续适宜稀释度
各取1mL分别加入灭菌平皿内
（每个稀释度做两个平行）
每皿内加入适量平板计数琼脂（PCA）
35 ℃ ，48 ± 2h
菌落计数
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FDA BAM 菌落计数方法
选择25~250CFU之间的菌落进行计数，计算公式如下：
N=∑C/（1*n1+*n2）*d
所有平板的菌落数都不足25CFU，报告EAPC/ml（g）为＜25*1/d。
EAPC：estimated aerobic plate count
所有平板的菌落数都超过250CFU，但不足100/cm2 ，报告EAPC/ml（g）为最接近250CFU的平板菌落数的估计值，乘以相应的稀释度。
所有平板的菌落数都超过100/cm2 ，计算平板的面积（直径为90mm的平板面积为65cm2），估计最高稀释度每cm2的菌落数，乘以相应平板面积作为该稀释度的菌落计数结果，报告EAPC/ml（g）为＞65*100* 1/d。
无法计数的平板报告LA（Laboratory Accident）。
最终结果保留前两位有效数字。按照4舍6入，5是奇进偶不进。
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ISO4833-2003 菌落总数测定流程
检样xg/mL+9xml稀释液（磷酸盐缓冲液）
适当十倍稀释样品
选择2~3个连续适宜稀释度
各取1mL分别加入灭菌平皿内
（每个稀释度做两个平行）
每皿内加入适量（12~15mL）
平板计数琼脂（PCA），
30±1 ℃ ，72 ±3 h
菌落计数
如果怀疑样品中含有在培养基表面蔓延生长的菌落，待琼脂凝固后，在其上覆盖一层（4mL）水琼脂。
平板叠放不超过6个
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ISO4833-2003菌落计数方法
选择连续2个稀释度不超过300CFU的平板，且一个平板至少含15CFU进行计数，计算公式如下：
N=∑C/（n1+*n2）*d
所有平板的菌落数都不足15CFU，计算2平板菌落的算术平均值m，液体样品：NE=m
固体样品： NE=m×d-1
无菌生长：液体样品：less than 1; 固体样品：less than 1 ×d-1
最终结果保留前两位有效数字。
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菌落总数测定几点说明
由于检样中采用30/35℃有氧条件下培养，因而并不是样品中实际的总活菌数，一些特殊营养要求的细菌、厌氧菌、微需氧菌、以及非嗜中温细菌，均难以反映出来。
鉴于食品检样中的细菌细胞是以单个、成双、链状、葡萄状或成堆的形式存在，因而在平板上出现的菌落可以来源于细胞块，也可以来源于单个细胞，因而平板上所得菌落的数字不应报告活菌数，而应以单位重量、容积或表面积内的菌落数或菌落形成单位（colony forming units，CFU）报告。
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菌落总数测定几点要求
每个样品从开始稀释到倾注最后一个平皿所用的时间不得超过15min，主要为防止细菌增殖和产生片状菌落。样液与琼脂应充分混合，避免将混合物溅到平