细胞传代实验报告最新版本.doc

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细胞传代培养

初步掌握哺乳动物细胞的原代培养与传代培养的基本操作过程，为生物技术在医学上的
应用打下基础。
二、原理
从生物体中取出某种组织或细胞，模拟体内生理条件，在人工培养条件下使其生存、生
长、繁殖或传代，这一过程称为细胞培养。细胞培养技术的最大优点是使我们得以直接观察
活细胞，并在有控制的环境条件下进行实验，避免了体内实验时的许多复杂因素，还可以与
体内实验互为补充，可同时提供大量生物性状相同的细胞作为研究对象，耗费少，比较经济，
因此成为生物学研究的重要手段。
细胞培养可分为原代培养和传代(继代)培养。直接从体内获取的组织细胞进行首次培养为
原代培养；当原代培养的细胞增殖达到一定密度后，则需要做再培养，即将培养的细胞分散
后，从一个容器以1：2或其他比率转移到另一个或几个容器中扩大培养，为传代培养，传
代培养的累积次数就是细胞的代数。
细胞培养是一种程序复杂、要求条件多而严格的实验性工作。所有离体细胞的生长都受
温度、渗透压、ph值、无机盐影响，消毒、配液等均有严格的规范和要求，特别是无菌操
作是细胞培养成败的关键。
三、材料和试剂
1、细胞：293细胞株
2、试剂：％胰酶、1640培养基（含10％小牛血清）
3、仪器和器材：倒置显微镜，培养箱、电动枪，培养板，吸液枪，5ml玻璃吸管、酒精
灯等
四、操作步骤
1、将长满细胞的培养板中原来的培养液吸去。
2、加入1~2ml ％胰酶溶液，使板底细胞都浸入溶液中。
3、马上吸走胰酶液 ，再次加入2ml左右的胰酶，同样马上吸去，再加入几滴胰酶放入 培养箱中消化几分钟
4、用吸管将贴壁的细胞反复吹打成悬液，再按照 观察的生长情况确定的传代比例传代
（剩余的细胞拿来做细胞计数），加入4ml左右的培养液
，将培养板放入培养箱

附：消化液配制方法：
，加入100ml10xpbs+纯水溶解到1l，滤器过滤除菌，4℃保存，
用前可在37℃下回温。
10x pbs配方：na2hpo4() kh2po4() nacl(80g) kcl()
(调 至ph=）
五、实验结果
传代后的细胞在2小时左右就能附着在培养瓶壁上，2天左右就在瓶内形成单层，
达到七八成满。这时需再次传代
六、讨论与反思
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无菌操作中的注意事项
在无菌操作中，一定要保持工作区的无菌清洁。为此，在操作前要认真地洗手并用75％乙醇消毒。操作前20～30分钟起动超净台灭菌。培养瓶要在超净台内才能打开瓶塞，打开之前和加塞前瓶口都要在酒精灯上烧一下，打开瓶口后的操作全部都要在超净台内完成。操作完毕后，加上瓶塞，才能拿到超净台外。使用的吸管在从消毒的铁筒中取出后要手拿末端，将尖端在火上烧一下，戴上胶皮乳头，然后再去吸取液体。总之，在整个无菌操作过程中都应该在酒精灯的周围进行。
每天观察细胞形态，掌握好细胞是否健康的标准：健康细胞的形态饱满，折光性好，生长致密时即可传代。