喹噁啉类药物致突变分子机理的研究论文.pdf

噌躏差≮式等‘喹嚷啉类药物致突变分子机理的研究中请学位门娄级别:—垂兰塑±..硕士学位论文瑕、王院:麴堑星堂瞳师·.堂叠蕉塾量称:基塾萱匡堂向:萱匡荭垄生圭垄堂生:隧篮业研究导教专名方所在学二零零六年六月卦粪导密蜒:单忙代码号
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骼唁独创性声明关于论文使用授权的说明酿,一螽月【阦月,铜C艿难宦畚脑诮饷芎笥ψ袷卮诵本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均研究生签名本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留送交论文的复印件和磁盘,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。一月,已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。时间:导师签名时问时间
、灵敏的检测单个细胞狭训募际酰蒓】等晔状翁岢觯⒗酶眉术在中性条件下检测湎咭鸬腄域链断裂。年,冉⒘思钚缘ハ赴旱泳技术,该技术不仅可以检测ァ⑺炊狭眩箍捎美醇觳饧钚圆晃榷ㄎ坏恪交联和不完全切除修复位点等。年,等对该方法进行了进一步改进,并利用核酸内切酶和甲酰胺嘧啶糖基酶分别检测了氧化嘧啶和腔襦堰实乃鹕恕辏琒等首次将技术与ü庠辉咏患际的应用开辟了新的途径。我国朱志良博士率先在国内建立了彗星一荧光原位杂交技术体系,并利用该技术体系发现人湃旧迨潜酱徊锏陌腥旧濉彗星试验方法适用范围厂泛,该方法适用于各种体内体外试验,凡是能制成单细胞悬液的各种真核生物细胞均适用于彗星试验,另外彗星试验的独特之处在于,可以检测单细胞的伤,这就为受试物毒作用的靶细胞定能提供了可能【当各种内源性年¨外源性鹕艘蜃佑辗⑾赴鸇链断裂时,某菪峁故艿狡坏,在细胞裂解液作用下,细胞膜、核膜等膜结构受到破坏,细胞内的蛋白质、约捌渌成分均扩散到细胞裂解液中,而核捎诜肿恿刻ù笾荒芰粼谠唬恢行蕴跫保珼片段可进入凝胶发生迁移,而在碱处理和碱性电解质作用珼发生解螺旋,废蛲馍煺梗损伤的狭慈笨诒┞读艘跣缘绾桑遬偈笵变性和解螺旋,从而有利丁单链和双链掀囊贫T诘绯×ψ饔孟拢赴酥写跣缘绾傻腄断片离开核谀悍肿筛中向阳极移动纬伞板缧恰弊赐枷瘢珼链缺口越多,进入尾部的蕉啵硐治N渤和尾部荧光强度增加;来损伤细胞在电泳中酝A粲诤酥行纬稍残斡ü馔拧薄T谝欢ㄌ跫下,ㄒ凭嗬彗星尾长健含量ü馇慷分布与鹕顺潭瘸氏咝韵嘬剑虼耍尾矩膊緿的含簧与尾长的乘积蛔魑猄糠治龅闹饕R谰輀】。作为检测妓鹕说氖匝椋琒匝橛τ貌溉槎镆1认妇匝薷词匝楹陨匝和噬菌体试验更有利于将试验结果外推于动物平人;另一方面它又比同样应用哺乳动物细胞的姊妹染色单体交换实验头浅绦駾合成试验闹芷谌宋K醵蹋必等到粗坪拖赴至眩虼耸视糜诓荒茉鲋车南赴灰J腔畹恼婧讼赴涂梢杂枚”鼍单细胞凝胶电泳宄棋缧鞘匝,是一現结合起来,为技术.%.
警检查,活细胞整个呈现绿色,死细胞仅见红核,正在死亡的细胞则只有绿色颗粒而核早觑红色。试验。根据电泳条件的不同可以分为中性电泳和碱性电泳,中性电泳用于检测炊裂,只限于研究射线和拟辐射化合物对乃鹕俗饔谩緇】;而碱性处理可检测、和碱性不稳定损伤。据报道许多处理因素造成的要比多叮虼思钚許大大提高了检测灵敏度。目前该技术在世界上很多实验室应用,操作上不断地进行改良,不断地融进新技术‘”。细胞染毒一细胞悬浮液的制备一载玻片凝胶体的制备一细胞裂解一钚越庑籇电泳一中和一染色一图像观察一数据分析嘲绮谑匝榧际趸静僮鞒绦日訲样品细胞需要餐少,细胞可来自培养的细胞系或从人、动物和植物活体组织分离的细胞,年,Ⅷ等报道刚于分析的原代细胞将近种,目前已用过的细胞有人的外周血淋巴细胞、表皮细胞、成纤维细胞、睾丸细胞、肿瘤细胞等;动物有肝细胞、血淋巴细胞;细胞存活率是一个重要的参数,它用来区分细胞毒性和遗传毒性,国外比较先进的方法是用溴化乙锭和欢然ü馑厮宜狨サ乃玖戏ā一二羧基荧光素舣乙酸酯染色后荧光镜国内通常采用台酚兰染色,活细胞不会被染色,而死亡细胞会成蓝色。一般细胞存活率大于%时认为受试物没有细胞毒性,可以继续进行试验。但有研究证明台酚兰不能检测细胞活性,它只能说明细胞膜是否完整。晟好的检测方法应该是控制对照组细胞不能出现拖尾现象,只能是或尾部俜趾吭プ笥摇俊细胞可以冷冻保存,便丁日后用于分析,因为要求的是3滞暾