检测口蹄疫血清抗体的方法.doc

检测口蹄疫血清抗体的方法
（一）口蹄疫正向间接红细胞凝集试验（间接血凝试验）
该试验是以口蹄疫 O、A、 C、 Asia-1 型病毒和猪水泡病病毒的细胞培养物（细胞毒）经 PEG 浓缩，蔗糖密度梯度超离后纯化的病毒抗原分别致敏戊二醛鞣酸处理的绵羊红细胞，而制成的血凝抗原，用于快速检测动物血清中的口蹄
疫和猪水泡病特异抗体水平。
该法简易、快速、特异、直观、是当前测抗的实用方法。
1． 试验材料 V 型 96 孔 110。 医用血凝滴定板 、玻璃板（与血凝板大小相同）、微量移液器（ 10~100 微升）、塑料咀、微量振荡器、 1 毫升 /5 毫升 刻
度玻璃吸管、玻璃中试管（内径毫米，长度
100 毫米）、铝质试管架（ 40 孔）、
口蹄疫各型和猪水泡正向间接血凝诊断液、
口蹄疫 O、A、C、Asia-1 型阳性血清、
SVD阳性血清、阴性血清、稀释液。
2．试验方法 根据试验目的可分为用于鉴别诊断；
用于监测疫苗接种动物的
抗体水平的检测方法。
（1）
疫苗接种动物抗体水平监测方法
接种何种疫苗就使用何种正向血凝诊断液。
①稀释待检血清
在血凝板上 1~8 孔各加稀释液
50 微升，取待检血清 50
微升加入第
1 孔，混匀后从中取出 50 微升加入第 2 孔，混匀后从中取出 50 微
升加入第 3 孔 直至第 8 孔混匀后从该孔取出
50 微升 丢弃，保持每孔 50 微
升的剂量。此时 1~8 孔的血清稀释度依次为
1： 2、1：4、1：8、1：16；1：32、
1：64、1：128、1：256。
②稀释阴性对照血清
取中试管 1 支加稀释液毫升，再加阴性血清毫升，充
分摇匀阴性血清的稀释度即为
1： 16。
③稀释阳性对照血清
取中试管 5 支，第 1 管加稀释液毫升，第 2~5 管分别
加稀释液毫升，取阳性血清毫升
加入第 1 管混匀后从中取出毫升，加入第 2 管
混匀后从中取出毫升，加入第
3 管 直至第 5
管，此时各管阳性血清的稀释
度低次为 1：32、 1：64、 1：128、1：256、 1： 512。
④滴加对照孔
取 1：16 稀释的阴性血清 50 微升加入血凝板的第 10 孔；取
1：500 稀释的阳性血清
50 微升加入第 11 孔；取稀释液
50 微升加入第 12 孔。
⑤滴加正向血凝诊断液
取正向血凝诊断液充分摇匀（瓶底应无血球沉
淀），每孔各加 25
微升后立即置微量振荡器上振荡
1
分钟，取下血凝板放在白
纸上观察每孔中的血球是否均匀（孔底应无血球沉淀）
。如仍有部分孔底出现血
球沉积，应继续振荡直至完全混匀为止。
⑥静置
将血凝板放在室温下 （15~30℃）静置 2h 后判定检测结果， 若结果
不清晰或来不及判定，也可放置第 2 天判定。
⑦判定标准
先观察 10~12 孔（对照孔），第 10 孔为阴性血清对照，应无
红细胞凝集现象，红细胞全部沉入孔底，形成小园点或仅有
25%