检测口蹄疫血清抗体的方法.doc

检测口蹄疫血清抗体的方法
(一)口蹄疫正向间接红细胞凝集试验(间接血凝试验)
该试验是以口蹄疫O、A、C、Asia-1型病毒和猪水泡病病毒的细胞培养物(细胞毒)经PEG浓缩,蔗糖密度梯度超离后纯化的病毒抗原分别致敏戊二醛鞣酸处理的绵羊红细胞,而制成的血凝抗原,用于快速检测动物血清中的口蹄疫和猪水泡病特异抗体水平。
该法简易、快速、特异、直观、是当前测抗的实用方法。
1. 试验材料 V型96孔110。医用血凝滴定板、玻璃板(与血凝板大小相同)、微量移液器(10~100微升)、塑料咀、微量振荡器、1毫升/5毫升刻度玻璃吸管、玻璃中试管(,长度100毫米)、铝质试管架(40孔)、口蹄疫各型和猪水泡正向间接血凝诊断液、口蹄疫O、A、C、Asia-1型阳性血清、SVD阳性血清、阴性血清、稀释液。
;用于监测疫苗接种动物的抗体水平的检测方法。
(1) 疫苗接种动物抗体水平监测方法
接种何种疫苗就使用何种正向血凝诊断液。
①稀释待检血清在血凝板上1~8孔各加稀释液50微升,取待检血清50微升加入第1孔,混匀后从中取出50微升加入第2孔,混匀后从中取出50微升加入第3孔??直至第8孔混匀后从该孔取出50微升丢弃,保持每孔50微升的剂量。此时1~8孔的血清稀释度依次为1:2、
1:4、1:8、1:16;1:32、1:64、1:128、1:256。
②,,充分摇匀阴性血清的稀释度即为1:16。
③稀释阳性对照血清取中试管5支,,第2~,,,加入第3管??直至第5管,此时各管阳性血清的稀释度低次为1:32、1:64、1:128、1:256、1:512。④滴加对照孔取1:16稀释的阴性血清50微升加入血凝板的第10孔;取1:500稀释的阳性血清50微升加入第11孔;取稀释液50微升加入第12孔。⑤滴加正向血凝诊断液取正向血凝诊断液充分摇匀(瓶底应无血球沉淀),每孔各加25微升后立即置微量振荡器上振荡1分钟,取下血凝板放在白纸上观察每孔中的血球是否均匀(孔底应无血球沉淀)。如仍有部分孔底出现血球沉积,应继续振荡直至完全混匀为止。
⑥静置将血凝板放在室温下(15~30℃)静置2h后判定检测结果,若结果不清晰或来不及判定,也可放置第2天判定。
⑦判定标准先观察10~12孔(对照孔),第10孔为阴性血清对照,应无红细胞凝集现象,红细胞全部沉入孔底,形成小园点或仅有25%红细胞有凝集(“+”的凝集);第11孔为阳性血清对照,应出现“++”以上的凝集(50%以上的红细
胞发生凝集),证明该批正向诊断液的效价达到1:512为合格;第12孔为稀释液对照,红细胞也应全部沉入孔底或只有“+”的凝集。
在上述对照合格的前提下,观察待检血清各孔,以出现“++”凝集的待检血清最大稀释度为其抗体效价。例如检测接种口蹄疫O型灭活疫苗的猪群免疫水平时,某份血清1-7孔出现“++”或“++”以上(+++~#)凝集而第8孔仅有“+”凝集,判定该份血清中的O型抗体效价为1:128。
经实验室测