trail诱导乳腺癌细胞凋亡的分子机制研究论文.pdf

协和医科大学博士研究生学位论文
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协和医科大学博士研究生学位论文摘要
中文摘要
肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体
,简称能特异性地诱导多种肿瘤细胞,包括大肠、肺、
乳腺、中枢神经系统、血液、肝、肾和恶性黑色素瘤等肿瘤细胞凋亡,而对大多数的
正常细胞几乎没有毒性。然而也存在一些细胞系对不敏感,如乳腺癌
细胞,因此限制了用于肿瘤治疗的范围。这些肿瘤细胞对不敏感性的
分子机制是什么尚不清楚。
我们实验室在以往研究中,采用差减杂交的方法,分析了人淋巴细胞白血病细
胞株」经处理前后细胞内基因表达的变化,发现的表达水
平显著降低。,是和家族的新成员,其分子中包括氨基端
的个富含亮氨酸的重复序列以及梭基端的最早在
蛋白中被发现,故用三个蛋白质开头字母缩写表示结构域,这两种结构域均
可与其它蛋白结合。最早是作为结合蛋白被发现,随后又找到了一些
的结合蛋白,如紧密连接成分和,以及半桥粒成分
和类天疙疮抗原等。在细胞内还扮演许多重要的角色。在细胞中,
的结构域选择性地与突变激活的结合,从而阻断其与的联系,导致
这条信号通路被抑制。因此,不仅能定位受体和传递细胞刺激信号,而且参与
建立并维持细胞与细胞、细胞与基底膜之间的粘合。进一步研究在信号通路中
的作用对于我们理解细胞的体内平衡及癌变有重要的意义。
本研究以对敏感和不敏感的乳腺癌细胞株和为模型,
比较其敏感性不同的分子机制,分析细胞的耐药机理。首先通过阻断细胞内几
条主要的存活通路工来改变细胞对的敏感性,结果表明,
在对敏感的细胞中,阻断以上三条存活通路都不增加
细胞对的敏感性。但在对不敏感的细胞中,
用抑制能够增加诱导的细胞凋亡,而用抑制
剂阻断途径或用阻断途径都不能增加细胞对
的敏感性。提示信号通路可能是阻碍细胞对敏感性的重要因
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素。进一步研究表明,在细胞中,和联合作用抑制从
细胞质向细胞膜移位,并且降低细胞膜上的激酶活性。能够完全消除
和联合作用对细胞的影响。这些结果提供明确的证据在
细胞中,调节诱导的细胞凋亡。作为一个重要的转录因
子,它的转录活性决定细胞对的敏感性。研究表明抑制活性,
可以下调的转录活性,从而增加细胞对的敏感性,促进细胞
凋亡。我们进一步研究了对诱导细胞凋亡信号通路的影响。
是一种缺陷的细胞,重新转入功能完整的不影响细胞内的
高表达,而且和联合作用诱导的细胞凋亡是依赖的,但
不依赖于和。。在细胞执行凋亡的过程中,抗凋亡蛋白的表
达明显增加。以上结果提示在细胞中通过下调的转录活性,
从而增加细胞对的敏感性。和联合作用,不但激
活受体一级联〔,而且激活细胞凋亡的线粒体途径。另外,与
协同作用明显增加细胞对的敏感性。因此,推测可能位于
途径上游,能够与途径协同作用抵抗诱导细胞凋亡。
为了研究在诱导的细胞凋亡中的作用及其和的关系,我们
分析了和联合作用对和表达的影响,结果显示
本身就能下调和的表达。相反,抑制或对于和
的表达没有影响。为了进一步研究这两个因子间的关系,我们采用技术,分别
抑制这两个基因的表达,结果显示抑制和后都能增加细胞对
的敏感性,并且抑制后能够下调的结构域过表达能
够增加蛋白的表达水平反之,抑制对的表达没有影响。因此,
在调节的表达水平、提高细胞对化疗药物的敏感性起重要作用。
本研究为理解细胞对的耐药机制和阐述对的调节
作用提供了新的资料,同时为降低的表达水平和治疗乳腺癌提供了新的策略。
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均
协和医科大学博廿研究生学位论文英文摘要
多
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缩写词表
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一
协和医科大学博士研究生学位论文第一章前言
第一章人乳腺癌细胞对耐药机制的研究
前言
年等在人胎盘文库中发现一种与很相似的
超家族成员,命名为,也称为相关凋亡诱导配体
由氨基酸组成,分子量约为
是一种型跨膜蛋白,分为胞浆区、跨膜区和胞膜外区三部分。
胞膜外区有一个蛋白酶作用位点,可以从膜上被剪切下来,形成可溶性分子。
可形成同源二三聚体,它与超家族其它成员有同源性,其中与同
源性最高
能特异性地诱导多种肿瘤包括大肠、肺、乳腺、中枢神经系统、血液、
肝、肾和恶性黑色素瘤等肿瘤细胞凋亡,而对大多