TRAIL诱导大肠癌细胞凋亡研究.pdf

浙江大学
博士学位论文
TRAIL诱导大肠癌细胞凋亡的研究
姓名:刘君伟
申请学位级别:博士
专业:肿瘤学
指导教师:郑树

死亡受体细胞色素程序性细胞死亡感宰R相关死亡区域蛋白狈Π谇虻腡受体激活诱导性死亡蛲龅鞍酌讣せ钜蜃殴性受体抑制蛋白型干扰素荒┒·狝猺狝—猯—
大~~研的癌一肠~导~‘究亡~捅一细一诱一中文摘要药,但体内川药发现丁干¨会导致严重!砩链薺受到械人限制。且城市明显高于农村。性肿瘤的治疗现在采取的是一种包括外科,化疗,放疗以及生物治疗在内的综合治疗。其中化疗,放疗以及生物治疗在肿瘤治疗中正显示愈来愈5淖鞔ǎ舛种疗方法的一个共同特点就是消除肿瘤或有效诱导肿瘤细胞凋产而达到杀灭肿癖钏胞的亡受体途径。线粒体途径中,由死亡信号引起线粒体渗透性转换,卓F簦瓜吡L迥诘蛲鱿喙氐鞍祝赴谻。释放到胞浆中,在细胞色素斡胂率迪諥一与赶到合,并启动读7从Γ钪沼辗⑾,个非常迫切的年代,【浚裥灾琢系疾病,为威胁人类生命与健康的一个重人疾病,闵此如何治疗肿问题。人肠癌作为其中的一利瘛甀福谖亦蔶⑸我病畆凋亡是细胞止常生命周的终末,Ⅱ;宓南赴3志弧V窒赴鸍低龅亩态平衡,无论是细胞增生异常,,丁细胞凋亡的研究无论在理论探讨还琏纯实际府川中都细胞凋亡的另一条途径是北亡受体介导的细胞稠产途径,中要包括甌,.蚑—珼途径。鸉雧人为灶曲簂⋯常订潜力的抗瘤是一恶ぐ嗟囊庖濉的。\
但关于源蟪Π┫赴纳镄в吭蛏惺跫ū拧构建了娜诤闲钒字柿<八幕匪氐骺氐恼婧吮泶镏柿#艚ā籎环豪渊控的真核在基因治疗中除了目的基硪桓隼鰈临的难题眑艰『:呐┐锝鴍河细胞的生物效鹰及可能作作机理将是一个北常贝有麻川前髓的题。与岷县矗捎盏枷赴焖俚蛲觥与駾结合后商接或通过其效的调控,以确保治疗效果,,共发现有质芴迥苡隩结合,这些受体包括珼,由于苡行в盏级嘀种琢鱿赴ǘ訤幻舾械腏痛细胞发,悖海琷进一步在小鼠的体内实验中证实,茚芤恍в盏即╮痈细Ψⅰ痟‘,刈’常细胞则无毒性作刚,因此鲆桓霰萒和哑耻想㈨“汀苀疋选化甃⋯。为证实匀顺︽兆訧淖鞔ㄐЧ运烟健￡¨,,素诱导非常密切的蚩白。属丁易澹且恢挚缒媵葑鴋,『闷』,,瘴鄯⑾赴。这一过程能被和簍行А籮且断。ā九体外海甀的载体就是四环素调控的真矍洞锕:饫嘭驮齀性,冈此可通过政变四环素的诱导女:及都涿妆呓?。如能川四环素调控贘篺枷赴鹟』的嵌达,』源耸跹芯縏州『瘤胚ざ德’,穆豄效髭达肝,通墙麶研究发现的一个騬:关系N蘼壑啡獽还足¨符‘均能伙蚀诱:十州胞艇小萃淹猗蜫和胞浆个州。心捉芯溃琯:緁蘽肢川囊乐,个,山序列分仪洲;蜇赘危凋亡。疍,扪畆’。琲、/、、、
其妄诛蚑谋泶锴榭觥7⑾謘第一部分:诤系鞍字柿<八幕匪氐骺卣婧吮泶镏柿5墓菇,,提取人肠癌细胞株赴淖躌,采川二懿釹第二部分:盏即蟪Π┫赴蛲龅难芯浚/本研究以新鲜人胚胎鹤橹淖躌为模扳,采川受态人肠杆峨,扩增,提墩质车蕾,经酶及测序临;八段,之川Ⅲ勺篿“á怼方向无误,、马斯亮兰染色,结果发现在处有一特异性条带,为’卜诤侠篒。‘化感’蹙忐人肠¨『岸过相差显微镜,染色及呀馄误馐侄畏治鯰对人肠癌细胞的捌:两导效成;,ü嘞蛎庖哂〖T咏挥懿狻甹緇’:将此—锟寺〉絧猅—找体,馔7治龈巍爸ㄋ丁篔序列隚数据库中的序列完全一致。将此蛄杏隚融合基冈载体绣冒畏从Γ瑌々化、一Ⅶ曳痶;“物一旧环素扩增质粒后,川睬兄な礣匕插入—找怫,儿的表达,因此且桓隼硐氲淖H綯壁奶蚁赴橹柿4╨H竟蜸/埃籪,肐咚以探讨揪吨杏形拚饬礁龅懊诺牟蝘┰,九’淋肝,川,≮也将——↖诱导;舱蚉、轙甹瘢;。门对,
提取对照组细胞和四环素诱导后小时痯甇甌细胞的总蟹是囊桓鍪芴澹捎赥鄙侔谒劳銮颍虼薚荒将牡蛲鲂藕糯ǖ莸桨凇R延醒芯肯允綯诖蠖嗍琢鱿赴抵胁槐泶第三部分:在大肠癌及正常大肠黏膜组织中表达的研究。蛋白的表达水无明显差异,推测盏枷赴蛲鐾揪恫煌ü齈与】.兜菰觥旧ê蠓⑾郑哉兆橄赴仕笮危送暾赴鞍巳旧ň总蛋白浓度检测试剂盒测定各个蛋白质样本的浓度后,采蛋白免疫印迹法检或低表达。但关于在肿瘤组织中的表达情况却极少报道,因此,┳橹罢4蟪︷つぶ械谋泶锴榭觥虰。腞丁一H竞笥胮进行筛选。在筛选后的H鞠赴屑尤胨幕匪兀⒎直鹪诘,,小时提取细胞总捎