DH5a大肠杆菌克隆菌株使用说明.doc

DH5a大肠杆菌克隆菌株使用说明.docDH5a大肠杆菌克隆菌株
编号
名称
北京华越洋生物NRR01300
DH5a大肠杆菌克隆菌株
基本信息：
名称DH5a大肠杆菌克隆菌株
规格300ul甘油菌
类别大肠杆菌克隆菌株 抗性无
培养基 LB
培养方式379,有氧
保存方式20%甘油，-80C 基因型：
F・ endAl glnV44 thi-1 rec Al relAl gyrA96 deoR nupG 08OdlacZAM15
A(lacZYA-argF)U169, hsdR17(rK- mK+J,入- 菌株简介：
DH5a菌株是实验室最常用的感受态细胞。缺失核酸内切酶(endA),提
高了质粒DNA的产量和质量；重组酶缺陷型(recA)减少插入片段的同源重
组概率，保证了插入DNA的稳定性；lacZAM15的存在使DH5a可用于蓝、
白斑筛选。DH5a菌株的缺点是生长缓慢，37°C需培12・14小时才能看见
克隆；如需加快试验速度，请选用TGI, Machl-Tl, XLIO-Gold等生长速
度快的感受态细胞。
操作说明：
本品包含一份甘油菌，使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表 面睡取少屋涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数 的增加，细菌的活力会逐渐下降。
为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽最先划半板，然后再挑单克隆 菌落进行后续操作。
冷冻管开封：
用浸过75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。
菌株复溶：
无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖，吸取1ml左右复溶液，加入到冷冻 管中。轻轻振荡，使冻干菌株溶解呈悬浮状。
菌株复壮：
用无菌吸管吸取菌悬液，转移到复溶液滴瓶中。做好标识，在适宜温度下培 养。细菌在30-35°C培养箱中培养24-48h,真菌在23-28aC培养箱中培养24-72h (必要时，可适当延长培养时间)。
菌株传代：
将紂到的菌株的新鲜培养物转接到适宜的固体培养基及液体培养基中(尽輦 增大接种最：如用无菌吸管吸取M50M新鲜培养物至固体培养基，边移动边缓
慢释放），适宜温度下培养，用以菌株的保藏、传代及制备工作菌株。
注意事项：
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