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PEG法诱导鸡血细胞融合
一、试验目
了解聚乙二醇（PEG）诱导体外细胞融合 基础原理。
经过PEG诱导鸡血细胞之间 融合试验, 初步掌握细胞融合 基础方法。
二、试验原理
细胞融合（cell fusion）又称体细胞杂交, 是指用人工方法使两个或两个以上 体细胞融合成异核体细胞, 随即, 异核体同时进入有丝分裂, 核膜瓦解, 来自两个亲本细胞 基因组合在一起形成只含有一个细胞核 杂种细胞（hybrid cell）。
细胞融合技术是研究细胞遗传、基因定位、细胞免疫、病毒和肿瘤 关键手段。依据融合过程采取 助融剂 不一样, 细胞融合可分为: 病毒诱导 细胞融合, 如仙台病毒(hemagglutinating virus of Japan,HVJ);化学因子诱导 细胞融合, 如聚乙二醇（polyethyleneglycol ,PEG）;电场诱导 细胞融合; 激光诱导 细胞融合。
聚乙二醇分子能改变各类细胞 膜结构, 使两细胞
接触点处质膜 脂类分子发生疏散和重组, 因为
两细胞接口处双分子层质膜 相互亲和以及相互
表面张力作用, 使细胞发生融合。
细胞融合 频率和活力与所用PEG分子质量、浓度、
作用时间、细胞 生理状态与密度等相关。
骨髓间质充质干细胞移植后 细胞融合
荧光标识 细胞融合
三．试验仪器、材料和试剂
仪器、用具: 注射器、刻度离心管、离心机、血细胞记数板、水浴锅、滴管、显微镜、烧杯、容量瓶、凹面载玻片、盖玻片、酒精灯等。
材料: 成年家鸡。
（1）%NaCl溶液:
（2）GKN液: , KCl, g Na2HPO4·2H2O,
g NaH2PO4·H2O, , , 溶于
1000ml重蒸水中。
（3）50%（m/v）PEG溶液: 取50gPEG(相对分子量=4000)放
入100ml瓶中, 高压灭菌20min。让PEG 冷却至50-60℃,
勿让其凝固。加入50ml预热至50℃ GKN 液, 混匀, 置
37℃备用。
（4） Hanks原液(10×): NaCl ; Na2HPO4·;
KCl ; KH2PO4 ; MgSO4·7H2O ;
葡萄糖 ; CaCl2 。
■ 试剂
CaCl2, 融于30-50ml 重蒸水中。取
1000ml 烧杯及容量瓶各一个, 先放重蒸水800ml于烧
杯中, 然后按上述配方次序, 逐一称取药品。必需在前
一药品完全溶解后, 方可加入下一药品, 直到葡萄糖完
全溶解后, 再将已溶解 CaCl2溶液加入, 最终加水至
1000ml。
（6）Hanks液: Hanks原液100 ml, 加重蒸水896 ml,
%酚红 4 ml。配好 Hanks液, 分装包扎好
贴上标签, 经过灭菌后, 4℃保留。
（7）詹纳斯绿染液。
（一）鸡血细胞 体外融合
取得
用肝素溶液润洗注射器, 从家鸡 翼根静脉用注射器采血, 注入试管后, 速加入肝素（100U肝素/5ml全血）混合, 制成抗凝全血。
制备
在抗凝全血 试管中, 加入4倍体积 %NaCl溶液, 制成红细胞贮备液, 置于4℃冰箱内可供一周内使用。
3、鸡血细胞悬液 制备
取细胞悬液1mL, %NaCl溶液混匀, 1200r/min离心5min, 弃上清液, 再加入5ml %NaCl溶液按上述条件离心两次（5分钟, 10分钟）。最终, 弃去上清液, 加入10ml GKN溶液, 制成鸡血细胞悬液。, GKN液进行稀释。
四、方法与步骤