2021年大鼠血红素氧合酶试剂盒说明指导书.doc

本试剂盒只能用于科学研究，不得用于医学诊断
大鼠（Rat）血红素氧合酶1（HO-1）ELISA检测试剂盒
使用阐明书(北京奇松生物提供)
检测原
试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附实验（ELISA）。往预先包被血红素氧合酶1（HO-1）抗体包被微孔中，依次加入标本、原则品、HRP标记检测抗体，通过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶催化下转化成蓝色，并在酸作用下转化成最后黄色。颜色深浅和样品中血红素氧合酶1（HO-1）呈正有关。用酶标仪在450nm波长下测定吸亮度（OD值），计算样品浓度。
样品收集、解决及保存办法
：使用不含热原和内毒素试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
：3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免重复冻融，在室温下解冻并保证样品均匀地充分解冻。
自备物品
酶标仪（450nm）
高精度加样器及枪头：-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
37℃恒温箱
操作注意事项
试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。
实验中不用板条应及时放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。
浓度为0S0号原则品即可视为阴性对照或者空白；按照阐明书操作时样本已经稀释5倍，最后成果乘以5才是样本实际浓度。
严格按照阐明书中标明时间、加液量及顺序进行温育操作。
所有液体组分使用前充分摇匀。
试剂盒构成
名称
96孔配备
48孔配备
备注
微孔酶标板
12孔×8条
12孔×4条
无
原则品
*6管
*6管
无
样本稀释液
6mL
3mL
无
检测抗体-HRP
10mL
5mL
无
20×洗涤缓冲液
25mL
15mL
按阐明书进行稀释
底物A
6mL
3mL
无
底物B
6mL
3mL
无
终结液
6mL
3mL
无
封板膜
2张
2张
无
阐明书
1份
1份
无
自封袋
1个
1个
无
注：原则品（S0-S5）浓度依次为：0、4、8、16、32、64U/L
试剂准备
20×洗涤缓冲液稀释：蒸馏水按1：20稀释，即1份20×洗涤缓冲液加19份蒸馏水。
洗板办法
手工洗板：甩尽孔内液体，每孔加满洗涤液，静置1min后甩尽孔内液体，在吸水纸上拍干，如此洗板5次。
自动洗板机：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。
操作环节
从室温平衡20min后铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
设立原则品孔和样本孔，原则品孔各加不同浓度原则品50μL；
样本孔先加待测样本10μL，再加样本稀释液40μL；空白孔不加。
除空白孔外，原则品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记检测抗体100μL，用封板膜封住反映孔，37℃水浴锅或恒温箱温