还原糖检测方法.doc

还原糖检测方法.doc还原糖检测方法
糖液质量的检测方法
1、 糖浆0D值的检测方法：
lml糖浆样品(DS%R30%) +9ml无水乙醇，迅速混匀后，在650nm 下测其0D值。
2、 斐林滴定法测DE值
淀粉酶将淀粉水解成短链的糊精及少量的葡萄糖。
斐林试剂由甲乙液组成，甲液为硫酸铜溶液，乙液为氢氧化钠与酒石 酸钾钠溶液。平时甲、乙液分别储存，测定时才等体积混合，混合时，硫 酸铜与氢氧化钠反应，生成氢氧化铜沉淀。
NaOH+ CuS04—Cu (OH) 2+NaSO4
生成的氢氧化铜和酒石酸钾钠反应，生成酒石酸钾钠与铜的络合物, 使氢氧化铜溶解。
COOK (CHOH) 2COONa + Cu (OH) 2—COOK (CHO ) 2 Cu COONa +2H2O 酒石酸钾钠铜络合物中的二价铜就是一个氧化剂，能使还原糖氧化，而二 价铜被还原成一价的红色氧化亚铜沉淀：
2 Cu (OH) 2—COOK (CHO) 2 Cu COONa + CHO (CHOH)4CH2OH +2 H20
— 2 COOK (CHOH) 2COONa + COOH (CHOH) 4CH2OH + Cu2O
剩余的二价铜在酸性调价下与碘化钾反应，生成碘，用硫代硫酸钠滴
定，12被还原成1-，随着其缓缓加入，颜色由棕黄色逐渐变成黄色，当呈 现淡黄色时，2%的淀粉指示剂，缓慢滴加硫代硫酸钠直至溶液中的蓝色消 失，为浅粉色，即为滴定终点。
通过这个反应，能够测量存在于淀粉水解物中的还原糖含量。用纯水 代替样品与斐林试剂反应，所消耗硫代硫酸钠的体积为空白值。
定义：
葡萄糖当量浓度（DE）代表淀粉水解的程度，是以葡萄糖计算的还原 糖含量占干物质的百分率，其数值的大小与淀粉水解的程度成正比。
化学试剂：
Na2CO3
C4H4O6KNa, 4H2O
CuS04
NaOH
葡萄糖（Dextrose）； HPLC 级
KI
12
H2SO4
Na2S2O3 5H2O
蒸馅水
试剂：
葡萄糖标准溶液的配制
1、调解电磁炉的加热功率，使45ml, 25°~ 达到沸腾；
2、水空白值的滴定:
加入25ml的蒸馅水，10ml斐林试剂甲液，10ml斐林乙液于250ml 的三角瓶中。
摇匀后，放在电炉上加热，沸腾2min后，放在冰箱中将其冷却到30°C 以下。
加入 10ml30%KI 和 10ml26%H2SO4 摇匀后用 Na2S2O3 滴定
滴定过程中不断的摇匀，随着硫代硫酸钠的缓慢加入，颜色由棕黄色 逐渐变为黄色，当呈现浅黄色时，加入2%的淀粉指示剂，缓慢滴加硫代 硫酸钠至溶液蓝色消失，为浅红色，即为滴定终点。
记录硫代硫酸钠的体积，即为空白滴定值。
3、标准葡萄糖溶液滴定
加入20ml蒸馅水，5mll%的葡萄糖溶液，10ml斐林甲液，10ml斐林 乙液试剂于250ml三角瓶中。
加入25ml蒸馅水，10ml斐林甲液，10ml斐林乙液试剂与50ml三角 瓶中。混匀后，放在电炉上加热，沸腾2分钟后，放在冰箱中迅速冷却到 30°C以下。