生物化学实验五酵母核糖核酸的分离及组分鉴定.docx

生物化学实验五酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
生物化学实验五酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
生物化学实验五酵母核糖核酸的分离及组分鉴定
实验五酵母核糖核酸的分别及组分判定
一、目的要求
学习和掌握稀碱法提取酵母 RNA的原理和方法；认识核酸的组分，并掌握判定核酸组分的方法。
二、实验原理
酵母核酸中 RNA含量许多。 RNA可溶于碱性溶液，在碱提取液中加入酸性乙醇溶液能够使解聚的核糖核酸积淀，由此即获得 RNA的粗制品。
核糖核酸含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮沸可使其水解，从水解液中能够测出上述组分的存在。
三、器械与试剂
1〉资料
酵母粉。
2〉器械
乳钵、 150ml 锥形瓶、水浴锅、量筒、吸管、洗耳球、漏斗、滴管、试管、试管架、烧杯、离心计、滤纸、试管夹。
3〉试剂
(1)
氢氧化钠溶液。
(2)酸性乙醇溶液：将 浓盐酸加入 30ml 的乙醇中。
(3)95%乙醇。
(4)乙醚。
(5)
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硫酸溶液。
(6)浓氨水。
(7)
硝酸银溶液。
(8)三氧化铁 -浓盐酸溶液：
将 2ml 10%三氧化铁溶液 (用 FeCl
3·6H
2O 配制 )加入到 400ml 浓盐酸中。
(9)苔黑酚乙醇溶液：
溶解 6g 苔黑酚于 100ml 95%乙醇中。
(10)定磷试剂。
%硫酸溶液：
将 17ml 浓硫酸 (比重
)慢慢加入到 83ml 水中。
b.
%钼酸铵溶液：将 钼酸铵溶于 100ml 水中。
%抗坏血酸：
将 10g 抗坏血酸溶于 100ml 水中，储于棕色瓶保留。溶液呈淡黄色时可用，如呈深黄色或棕色则无效。
临用时将上述 3 种溶液与水按比率混淆： 17%硫酸溶液︰
%钼酸铵溶液︰ 10%抗坏血酸︰水 =1︰1︰1︰2(体积分数 )。
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四、实验步骤
1〉RNA提取
将 10g 酵母悬浮于 90ml
氢氧化钠溶液中，并在乳钵中研磨平均。将悬浮液转移至 150ml 锥形瓶中。在开水浴上加热 30min 后，冷却。 (3000r/min) 离心 10 分钟，将上清液慢慢倾入 30ml 酸性乙醇