实验六 血凝和血凝抑制试验.ppt

一、实验目的
掌握血凝和血凝抑制试验的原理和操作方法，能够正确判定试验结果并对结果进行分析。
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二、血凝试验（ HEMAGGLUTINATION, HA）
血凝现象：有些病毒可凝集某些动物（如鸡、鹅、豚鼠、绵羊）和人的红细胞(RBC)
原理：血凝素与RBC表面相应受体结合，引起RBC凝集，用以测定病毒的含量
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HA试验的原理示意图
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用途：①确定病毒的含量；
②计算病毒的血凝价，为血凝抑制试验做准备
血凝价：能使血球产生50%凝集的病毒最高稀释度
血凝单位
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试验材料
鸡新城疫病毒
鸡红细胞：采集健康鸡血液，以阿氏液抗凝，用生理盐水洗涤3-5次，将血浆、白细胞等充分洗去，用生理盐水配成1%红细胞悬液备用
%生理盐水
96孔U型微量反应板、微量移液器、灭菌塑料吸头
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操作步骤
在血凝板第一排的1-12孔加入50UL生理盐水。
在第1孔中加入50UL病毒，混匀后吸50UL到第2孔，如此倍比稀释直到第10孔，混匀后弃50UL；最后两孔（11、12）为红细胞对照。
将1%的红细胞轻轻摇动混匀，在1-12孔中每孔加入50UL。
手工震荡，37℃静置30MIN (室温40分钟 )后观察结果
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结果判定
血凝价 A:26 B:25 C:22 D:27
A
B
C
D
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以50%的红细胞发生凝集的病毒悬液的最高稀释度作为该病毒液的红细胞凝聚效价，即一个血凝单位。
血凝价:
1:256
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三、血凝抑制试验（HemagglutinationInhibition, HI）
原理：抗体与血凝素结合，封闭血凝素，使之不能与红细胞结合
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