实验六 血清ALT活性测定1-课件.ppt

实验六实验六血清血清 ALT ALT 活性测定活性测定一、何谓一、何谓 ALT ALT ? ? 谷丙转氨酶谷丙转氨酶( ( glutamic pyruvic transaminase glutamic pyruvic transaminase , , GPT GPT ) ) 丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶( ( alanine aminotransferase alanine aminotransferase , , ALT ALT ) ) 复习复习: : ?反应式大多数氨基酸可参与转氨基作用,但赖氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸除外。二、二、 ALT ALT 催化的化学反应催化的化学反应: : 丙氨酸丙氨酸+ +αα- -酮戊二酸酮戊二酸丙丙酮酸酮酸+ + 谷氨酸谷氨酸 ALT ALT 三、三、 ALT ALT 的分布的分布: : 主要分布于肝、肾细胞、心肌细胞等,血主要分布于肝、肾细胞、心肌细胞等,血清中的含量很低。清中的含量很低。病变时,细胞受损,血清病变时,细胞受损,血清 ALT ALT 含量升高。含量升高。四、四、 ALT ALT 测定的临床意义: 测定的临床意义: 作为(肝脏)疾病诊断和预后判断的指作为(肝脏)疾病诊断和预后判断的指标之一。标之一。五、测定血清五、测定血清 ALT ALT 的方法: 的方法: King King 法法(金氏法) (金氏法) Reitman Reitman 法法(赖氏法) (赖氏法) Mohun Mohun 法法(穆氏法) (穆氏法) 1981 1981 年全国生化检验方法学讨论会确定年全国生化检验方法学讨论会确定用赖氏法(改良)作为临床首选,单位为: 用赖氏法(改良)作为临床首选,单位为: 卡门氏单位卡门氏单位。。实验六实验六血清血清 ALT ALT 活性测定活性测定--- ---改良赖氏法改良赖氏法一、实验性质: 一、实验性质: 分析性分析性二、目的及要求二、目的及要求 1 1、掌握、掌握 ALT ALT 测定的原理及临床意义测定的原理及临床意义 2 2、熟习测定的操作方法。、熟习测定的操作方法。丙氨酸丙氨酸+ +αα- -酮戊二酸酮戊二酸丙酮酸丙酮酸+ + 谷氨酸谷氨酸 ALT ALT ( (血清血清) ) 基质液基质液在一定反应条件下在一定反应条件下( ( , ,37℃) , , 作用作用 30 min 30 min : : 三、原理三、原理: : αα- -酮戊二酸酮戊二酸丙酮酸丙酮酸+ 2,4 + 2,4 二硝基苯肼二硝基苯肼αα- -酮戊二酸酮戊二酸-2,4 -2,4 二硝基苯腙二硝基苯腙丙酮酸丙酮酸-2,4 -2,4 二硝基苯腙二硝基苯腙两者在两者在碱性条件下碱性条件下呈呈红棕色红棕色,等摩尔浓度条件,等摩尔浓度条件下,丙酮酸下,丙酮酸 OD OD 值值大大a- a-酮戊二酸酮戊二酸 3 3倍。倍。四、试剂: 四、试剂: 省略省略 2 2 、、按下表操作: 按下表操作: 加入物加入物( ( ml ml ) )对照管对照管(B) (B) 测测定管定管(U) (U) 血清血清 基基质缓冲液质缓冲液—— 混匀, 混匀, 37 37 ℃℃水浴水浴 30min 30min (准确记时) (准确记时) 2,4 2,4 ——二硝基苯肼溶液二硝基苯肼溶液 基质缓冲液基质缓冲液 ——混匀, 混匀, 37 37 ℃℃水浴水浴 20min 20min ; ; 各管加入各管加入 M M NaOH NaOH ml ml ,室温放置,室温放置 10 min 10 min ; ; 在波长在波长 505 505 nm nm 处,以处,以蒸馏水蒸馏水校正零点,读取各管校正零点,读取各管吸光吸光度;根度;根据据(A (A U U --A --A B B ) ) 标准曲线,得到酶活性的卡门氏单位数。标准曲线,得到酶活性的卡门氏单位数。 1、将基质缓冲液和血清在37℃水浴箱预温 5min 。五、操作步骤: