实验六 血清ALT活性测定1.ppt

实验六血清ALT活性测定
一、何谓ALT?
谷丙转氨酶
(glutamic pyruvic transaminase,GPT)
丙氨酸氨基转移酶
(alanine aminotransferase,ALT)
复习:
反应式
大多数氨基酸可参与转氨基作用,但赖氨酸、脯氨酸、羟脯氨酸除外。
二、ALT催化的化学反应:
丙氨酸+α-酮戊二酸丙酮酸+ 谷氨酸
ALT
三、ALT的分布:
主要分布于肝、肾细胞、心肌细胞等,血清中的含量很低。
病变时,细胞受损,血清ALT含量升高。
四、ALT测定的临床意义:
作为(肝脏)疾病诊断和预后判断的指标之一。
五、测定血清ALT的方法:
King法(金氏法)
Reitman法(赖氏法)
Mohun法(穆氏法)
1981年全国生化检验方法学讨论会确定用赖氏法(改良)作为临床首选,单位为:卡门氏单位。
实验六 血清ALT活性测定 ---改良赖氏法
一、实验性质:分析性
二、目的及要求
1、掌握ALT测定的原理及临床意义
2、熟习测定的操作方法。
α-酮戊二酸
丙酮酸
+ 2,4 二硝基苯肼
α-酮戊二酸-2,4二硝基苯腙
丙酮酸-2,4 二硝基苯腙
两者在碱性条件下呈红棕色,等摩尔浓度条件下,丙酮酸 OD 值大 a-酮戊二酸 3倍。
四、试剂:省略
2、按下表操作:
加入物(ml) 对照管(B) 测定管(U)
血清
基质缓冲液—
混匀,37℃水浴30min(准确记时)
2,4—二硝基苯肼溶液
基质缓冲液 —
混匀,37℃水浴20min;
M NaOH ml,室温放置10 min;
在波长505 nm 处,以蒸馏水校正零点,读取各管吸光
度;根据(AU--AB) 标准曲线,得到酶活性的卡门氏单位数。
1、将基质缓冲液和血清在 37℃水浴箱
预温5min。
五、操作步骤: