液相色谱仪使用方法学习教案.pptx

一、什么是色谱
色谱是一种分离工具，而不是传统意义上的分析仪器。
色谱法也叫层析法，它是一种高效能的物理分离技术，将它用于分析化学并配合适当的检测手段，就成为色谱分析法。
常见的分离方法：
蒸馏、离心、电泳、过滤、超滤、等等。
色谱法的不相溶）；
基本原理：组分在固定相和流动相上的分配；
流动相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定液的极性（正相 normal phase），反之，流动相的极性大于固定液的极性（反相 reverse phase）。正相与反相的出峰顺序相反；
固定相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用；
化学键合固定相：将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶（担体）表面的游离羟基上。C18柱（反相柱）以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。
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反相高效液相色谱法
即指流动相的极性大于固定相极性的色谱方法。
在本法中常采用化学键合相作为固定相，流动相采用水—甲醇或水—乙腈系统，在反相色谱中，极性强的组分在分离时先流出柱子，极性弱的组分后流出。因此适合于共存组分极性差异较大的样品分析。
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乙腈(jīng)
乙腈又名甲基氰，分子式CH3CN，无色透明液体，密度小于水，，能与水和乙醇等有机溶剂以任意比混溶，易燃，有毒性。
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2、液-固吸附色谱
基本原理：各组分在固定相吸附剂上竞争性吸附与解吸
固定相：固体吸附剂为硅胶、氧化铝等，较常使用的是5～10μm的硅胶吸附剂；
流动相：各种不同极性的一元或多元溶剂。
特点：适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对具有官能团的化合物和异构体有较高选择性；
缺点：非线形等温吸附，常引起峰的拖尾
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六、色谱柱
液相色谱柱的分离作用是在填料与流动相之间进行的，柱子的分类是依据填料类型而定。
正相柱：多以硅胶为柱填料。根据外型可分为无定型和球型两种，其颗粒直径在3--CN,-NH2等官能团即所谓的键合相硅胶。
反相柱：主要是以硅胶为基质，在其表面键合十八烷基官能团(ODS)的(C18)非极性填料。也有无定型和球型之分。常用的其他的反相填料还有键合C8、C4、C2、苯基等，其颗粒粒径在3—10 μm之间。
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1. 色谱柱的选择
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2. 本公司使用的柱子
主要特点:
使用过程中柱压稳定，即使长时间使用也不会出现拖尾等异常情况
使用寿命长，清洗频度低，仅为同类产品的15%
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七、样品的前处理
a、最好使用流动相溶解样品。
b、使用予处理柱除去样品中的强极性或与 柱填料产生不可逆吸附的杂质。
c、 质。
d、利用超声仪脱气。
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八、流动相的配制
a、流动相对样品具有一定的溶解能力，保证样品组分不会沉淀在柱中 。
b、流动相具有一定惰性，与样品不产生化学反应。
c、流动相的黏度要尽量小，以便得到好的分离效 果；同时降低柱压，延长液体泵的使用寿命
d、流动相的物化性质要与使用的检测器相适应。最好使用对紫外吸收较低的溶剂配制。
e、流动相沸点不要太低，否则容易产生气泡。
f、在流动相配制好后， μm滤膜过滤，并进行脱气。
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九、流动相流速的选择
因柱效是柱中流动相线性流速的函数，使用不同的流速可得到不同的柱效。，流速一般选择1ml／min，，／min为佳。
当选用最佳流速时，分析时间可能延长。可采用改变流动相的洗涤强度的方法以缩短分析时间(如使用反相柱时，可适当增加甲醇或乙腈的含量)。
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十、检测过程的操作
样品检测前控制平台的准备工作
样品检测时的操作
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十一、HPLC常用操作步骤
1)首先对流动相进行过滤，。
2)对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟。
3)正常情况下，先用甲醇冲洗10-20分钟，然后再进入测试用流动相。
4)一般情况下，流动相冲洗20-30分钟后，仪器和基线稳定，方可进样测试。
5)同时进两针标样，-，可正式进