实验十一血清ALT测定(共4页).docx

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实验十一 血清ALT测定（赖氏法精选优质文档-----倾情为你奉上
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实验十一 血清ALT测定（赖氏法）
　　【目的】
。
活性测定的临床意义。
　　【原理】
　　丙氨酸与α-酮戊二酸在丙氨酸氨基转移酶（ALT）的作用下生成丙酮酸和谷氨酸。在反应到达规定时间时，加入2，4-二硝基苯肼-盐酸溶液以终止反应。生成的丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙。后者在碱性条件下显棕红色。根据颜色的深浅，求得血清中丙氨酸氨基转移酶的活力。反应式如下：
【器材】
试管、刻度吸管、恒温水浴箱、分光光度计。
【试剂】
　　1. 磷酸盐缓冲液（） 称取磷酸氢二钠(Na2HPO4，AR)，磷酸二氢钾(KH2PO4，AR)，加少量蒸馏水溶解并稀释至1 000ml。
　　 称取α-，， ,煮沸溶解后冷却，用1mol/L （）， 磷酸盐缓冲液在容量瓶内加至100ml，混匀，加氯仿数滴，置冰箱可保存数周。
　　（2μmol/ml） 精确称取丙酮酸钠(AR)， 。
　　，4-二硝基苯肼溶液 称取2，4-，用10mol/L盐酸10 ml溶解后，加蒸馏水至100ml，置棕色瓶内，冰箱保存。
　　 NaOH溶液 称取16gNaOH溶于适量蒸馏水中，然后稀释至1 000ml。
　　【操作】
　　取2支试管按下表操作：
表3-15 血清ALT测定（赖氏法）操作步骤
　　　　加入物（ml）
测定管
对照管
　　　　血清


　　　　ALT底物液

－
混匀，置37 oC水浴，保温30分钟
2，4－二硝基苯肼


　　　　ALT底物液
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－

混匀，置37 oC水浴，保温20分钟
　　　　 NaOH


混匀，静置10分钟，用505nm 波长比色，以蒸馏水调零，读取各管吸光度，用测定管吸光度值减去对照管吸光度值，查标准曲线得ALT活力单位。
【标准曲线绘制】
见下表：
表3-1