实验十一血清ALT测定(赖氏法)【目的】。。【原理】丙氨酸与α-酮戊二酸在丙氨酸氨基转移酶(ALT)的作用下生成丙酮酸和谷氨酸。在反应到达规定时间时,加入2,4-二硝基苯肼-盐酸溶液以终止反应。生成的丙酮酸与2,4-二硝基苯肼作用,生成丙酮酸2,4-二硝基苯腙。后者在碱性条件下显棕红色。根据颜色的深浅,求得血清中丙氨酸氨基转移酶的活力。反应式如下:【器材】试管、刻度吸管、恒温水浴箱、分光光度计。【试剂】()称取磷酸氢二钠(Na2HPO4,AR),磷酸二氢钾(KH2PO4,AR),加少量蒸馏水溶解并稀释至1000ml。-,,,煮沸溶解后冷却,用1mol/(),,混匀,加氯仿数滴,置冰箱可保存数周。(2μmol/ml)精确称取丙酮酸钠(AR),。,4-二硝基苯肼溶液称取2,4-,用10mol/L盐酸10ml溶解后,加蒸馏水至100ml,置棕色瓶内,冰箱保存。,然后稀释至1000ml。【操作】取2支试管按下表操作:表3-15血清ALT测定(赖氏法)操作步骤加入物(ml)-混匀,置37oC水浴,保温30分钟2,4--,置37oC水浴,.0混匀,静置10分钟,用505nm波长比色,以蒸馏水调零,读取各管吸光度,用测定管吸光度值减去对照管吸光度值,查标准曲线得ALT活力单位。【标准曲线绘制】见下表:表3-16血清ALT测定(赖氏法)标准曲线绘制操作步骤加入物(ml)管号012345丙酮酸标准液(2μmol/ml).,置37oC水浴,保温30分钟2,4-,置37oC水浴,.
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