男科学实验室诊断进展课件.ppt

关于男科学实验室诊断进展
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精液分析是评价男性生育能力的最基本检验手段。理论上，精液分析是一个很简单的操作过程，只要将一滴精液置于玻片上，进而确定其相关参数即可。然而，实际上，精液分析所得的每一个参数可一次性或反复多次使用，这在计数传染性较强的样本时将显示出独特的优势。
　　　因此，我们建议要建立一个标准的计数池操作系统用于所有实验室，从而为不同实验室的质量控制评价提供基础，最终提高所有实验室结果的准确性和可靠性。Cell-VU应是此标准计数池的最佳选择。
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（1）传统经典的“仓鼠卵穿刺实验”
（2）精子-宫颈粘液穿透试验
（3）毛细管穿透试验
（4）低渗肿胀试验
（5）吖啶橙染色(荧光显微镜)
（6）精子DNA完整性检测（流式细胞仪）
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精子DNA完整性检测亦称精子染色质结构分析， SCSA），是应用流式细胞仪检测精子功能的方法之一。精子发生过程中，鱼精蛋白逐步取代组蛋白与DNA结合。精子进入附睾后，鱼精蛋白的组成不再改变。但附睾中精子在逐步成熟的过程中，鱼精蛋白中大量的巯基(SH)不断被氧化成二硫键(S=S)，与DNA结合更加紧密，使DNA更具抗酸能力，维持了双链结构的稳定性。
精子DNA完整性检测（流式细胞仪）
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而染色质异常的精子，鱼精蛋白中多数巯基未被氧化，在酸的作用下易变性为单链DNA。根据这一原理，用酸处理精液样品，再行吖啶橙(AO)染色， AO可与双链DNA结合呈单体形式发出绿色荧光，与单链DNA结合呈聚合物形式发出红或黄色荧光。然后通过配有专用软件的流式细胞仪可进行数据处理得出SCSA参数。
精子DNA完整性检测（流式细胞仪）
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二、生精细胞检查与睾丸活检
1、生精细胞检查
精液中除成熟的精子外，亦可见未成熟的生精细胞，包括精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、早期和晚期精子细胞等
生精细胞检查方法：
染色法
荧光原位杂交
单克隆抗体免疫组化法
流式细胞术
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2、睾丸活检
开放活检、细针穿刺、活检枪、高能多谱勒超声为基础的睾丸活检
70年代 FSH可用放免方法测定，FSH水平可以反映生精功能受损程度，睾丸活检范围逐渐缩小，其适应证仅限于睾丸体积正常、FSH水平正常或轻度增高的无精子症病人。
80年代，精浆生化指标的测定可排除阻塞性无精子症，睾丸活检范围更小。
近年来，随着显微外科的发展和显微受精技术的应用，从精液中分离一条精子即可使卵子受精达到生育目的。因此，需行睾丸活检的病例更是寥寥无几。
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三、白细胞精子症的检测
精液白细胞数>1×106/ml，可诊断为白细胞精子症
白细胞可通过吞噬作用、产生活性氧（ROS）、分泌一些细胞因子等途径使精子损伤。精液中粒细胞为产生ROS的主要细胞。
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精液中白细胞的检测方法；
1、对ROS的检测：依赖鲁米诺的化学发光分析法
2、直接镜检法
3、瑞-姬染色或巴氏染色法染色
4、过氧化物酶染色法（正甲苯胺兰、联苯胺及邻甲苯胺过氧化物酶染色）
5、荧光原位杂交法
6、免疫细胞化学法 CD45，CD4，CD8
7、弹性蛋白酶、IL-8及溶菌酶测定
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四、免疫性不育的检测
检测方法很多，3种类别的抗精子抗体均可测，检测的抗精子抗体为总的或各种类别的抗精子膜抗原的抗体，而精子膜与人体其他器官组织的细胞膜有许多共同抗原，因而这种抗原抗体反应的特异性不高。如果用针对精子或睾丸特异性抗原，或针对与透明带识别和结合有关的抗原作为包被抗原来检测AsAb，其临床意义就会很大。
Naz等用现代分子生物学技术确定，受精抗原FA-1和YLP（12）具有此特性，并且它们的抗体存在于不育男性的精浆和血清中建立这种特异性诊断方法是今后取代总AsAb检测的唯一途径。
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五、生殖道感染的检测
大肠杆菌、葡萄球菌、链球菌、绿脓杆菌、淋球菌、肺炎克雷伯氏菌、结核杆菌、衣原体、支原体、单纯疱疹病毒、人乳头瘤病毒、腺相关病毒、阴道毛滴虫等皆可感染生殖道，而且可致不育。
各种细菌感染，往往通过菌体本身及其释放出的毒素、酶类等影响精子质量
病毒的感染更为隐蔽临床实验室多用ELISA法检测各种病毒的抗体，通过抗体的分型可粗略判断病毒的感染时期
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衣原体