使 用 说 闭酶的活性,而 Hotmaster Taq DNA 聚合酶是利用抑制剂通过温度调节方式封闭 Hotmaster Taq DNA 聚合酶的底物结 合位点,温度低于 40℃时,形成非活性的酶-抑制剂复合物,当温度升高至引物特异性的退火温度时,结合平衡向模 板-特异性引物复合物形成方向移动,因此最大限度的减少 PCR 扩增全程中的非特异性扩增产物产生,大大提高了荧 光定量 PCR 反应的精确性。 注意事项: 1. 本制品不含参比染料ROX,客户并根据qPCR仪器技术指导决定是否需要加ROX参比染料,用于消除信号本底以及校正孔与孔 之间产生的荧光信号误差,配套ROX产品货号为1538 Rox Reference Dye。 2. 本制品含SYBR® Green I 强光下易分解,降低敏感度,使用时避免长时间强光照射本制品。 3. 建议在冰上配制PCR反应液,再放入PCR仪器中扩增。可以提高扩增特异性,减少背景。 2+ 2+ 4. 本制品含有4 mM MgCl2(反应体系终浓度是2 mM Mg ),可用25mM MgCl2 优化Mg 浓度。
建议PCR条件(以50 μl反应体系为例,反应液配制请在冰上进行) Components Volume Final Concentration 2 x SYBR qPCR Mix 25 μl 1× DNA Template 2 μl as required Forward Primer (10 μM) 1 μl μM each Reverse Primer (10 μM) 1 μl μM each ddH2O to final volume 50 μl Not applicablePCR 循环(三步法) 94℃ 2-3 min 94℃10-20 sec 55-65℃ 10-20 sec 3
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