革兰氏染色.ppt

实训二革兰氏染色
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1 了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的生要性
2 学习并掌握革兰氏染色法
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二．实验原理

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1 了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的生要性
2 学习并掌握革兰氏染色法
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二．实验原理
。革兰氏染色法可将所有的细菌分为G+和G-，这是由两类细胞壁结构和成分不同所决定。
G+菌细胞壁中肽聚糖肥厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。
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G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂类，而且肽聚糖较薄，交联度低，故用乙醇脱色时溶解了类脂类，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫-碘的复合物易于渗出，细菌被脱色，再经过沙黄复染后成为红色。
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三 .实验仪器及材料
1 仪器：显微镜、酒精灯等
2 实验材料：
菌种：大肠杆菌，葡萄球菌
染色剂：草酸铵结晶紫、沙黄
媒染物：碘液
脱色剂：95%的酒精
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1 .涂片 ，2. 晾片， 3 .固定 ，4 .结晶紫染色：加适量的结晶紫染色2min，5 .水洗：倾去染色液，用水缓慢冲洗衣 ，6 .媒染：碘液，媒染2min，7 .水洗，用水冲去碘液，8 .脱色：将玻片倾斜，连续滴加班95%乙醇脱色30s，9 .复染：滴加沙黄复染1min。10 .水洗，11. 晾干：将染好的涂片用水吸干。12 .镜检时先用低倍，再用高倍，最后用油镜观察，判断菌体的革兰氏染色反应性。
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革兰氏染色步骤:
G+菌蓝紫色
葡
草酸铵结晶紫
革兰氏碘液
95%乙醇
沙黄
镜检
G-菌红色
大肠杆菌
固定
涂片
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注意事项
。如：脱色过度，革兰氏阳性菌也可能被脱色而成阴性菌：如脱色时间过短，革兰氏阴性菌也会被染成革兰氏阳性。
，若菌龄太老，由于菌体死亡或自常溶常使G+呈阴性反应。
。
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蓝紫色： G+
红色： G-
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六 思考
？其中关键的环节是哪些？
。
。
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，下次上实验课时交。
：涂片老师看后，方可离去（5分）
：包括实验后桌面桌面及地面卫生，显微镜等实验仪器及试剂摆放是否标准（5分）。
，美兰染色法，平板划线
，药敏实验。
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染色液配制：
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