脱毒苗培养.ppt

关于脱毒苗培养
第一页，讲稿共二十六页哦
一、脱毒的意义：
无性繁殖作物长期营养繁殖，易受病毒侵染，而使病毒在体内积累，导致种性退化，造成产量下降或品质降低甚至死亡，给农业造成巨大损失。
通过茎尖培养获得无植物中应用。
第十页，讲稿共二十六页哦
微体嫁接
第十一页，讲稿共二十六页哦
微体嫁接的方法：
（1）试管砧木的准备:将无病毒种子表面灭菌后接种与MS培养基，黑暗条件下培养15d使其发芽。
（2）茎尖嫁接：在超净工作台上，将幼苗的上胚轴和子叶去掉，根系截短，，长2-3cm的切口，在斜切口末端横切一刀，用去掉切下部分。在体视显微镜下，，小心放于切口的水平面上，切面向下并与砧木切口形成层组织紧密贴合，然后接于培养基上。
（3）嫁接苗培养：将嫁接苗置于光下培养，光照时数16h，嫁接1周后形成愈伤组织，2-3周愈合，5-6周后接穗发育为新梢。
第十二页，讲稿共二十六页哦
2. 微体嫁接脱毒的关键：
影响微体嫁接成活率的主要因素为接穗大小和取样时间。与接穗大小呈正相关，而无病毒植株获得与接穗茎尖的大小呈负相关。，春季取材嫁接的成活率高于其他季节。
第十三页，讲稿共二十六页哦
（3）热处理脱毒：
通过热处理可以由受病毒侵染的个体得到无病毒植株，其原理是利用病毒与植物的耐热性不同，在高于常温的环境下，植物组织中的病毒受热后可被部分或全部钝化或失去活性，而寄主植物组织很少或不会受到伤害。或高温下植物生长快，而病毒增殖慢而使植物新生部分不带病毒。
第十四页，讲稿共二十六页哦
：
可以通过温汤浸渍或热空气处理法脱毒，前者对休眠芽效果较好，后者对活跃生长的茎尖效果较好。
热空气处理即把旺盛生长的植物移入热疗室，在35-40℃下处理一定时间（几分钟到数周）热处理后将茎尖切下嫁接于无病毒砧木或进行组织培养。热处理温度应逐步升高，直到要求温度。
温汤浸渍的材料常用50-55 ℃处理10-50min或35 ℃温水处理30-40min。
第十五页，讲稿共二十六页哦
2. 热处理脱毒条件：
（1）温度和持续时间：因病毒种类而异，有些33-34℃处理28-33d即可脱毒，而有些必须在39-42 ℃处理50-60d，耐热杆状病毒热处理脱毒效果差。在植物的耐热范围内，温度越高，脱毒效果越好。一般采用35-38 ℃.尤其37℃恒温处理30±2天为普遍。也可采用高低温处理减少对植物的损伤。如马铃薯40 ℃ （4h）+16-20 ℃（20h）。
（2）湿度和光照：湿度以70-80%为适宜。光照以自然光最好。
（3）前处理：27-35 ℃ 1-2周。
第十六页，讲稿共二十六页哦
（四）其他脱毒方法：
花器官培养脱毒：由植物的花器官培养脱分化形成愈伤组织，然后再分化不定芽，可以获得无毒苗。如草莓花药培养。
2. 珠心胚培养脱毒：柑橘类珠心胚与微管组织没有联系，一般不带毒，可以利用珠心胚进行培养获得。
:采用病毒唑等试剂处理材料或添加到培养基中可以钝化病毒，达到一定的脱毒效果。
4. 超低温处理脱毒:经过冷冻保护剂处理过的茎尖材料，采用液氮处理（-196℃）可以钝化病毒，达到脱毒效果，该方法已在香蕉等果树中成功应用。
5. 合并热处理、茎尖培养或微嫁接脱毒：采用多种方法同时处理可以达到更好的脱毒效果。
第十七页，讲稿共二十六页哦
二、病毒检测方法：
1、形态鉴定： 根据植株的生长状态鉴定是否脱毒，但不准确。
2、指示植物鉴定法：利用特定的易于感染某些病毒的指示植物的特征进行病毒鉴定。
第十八页，讲稿共二十六页哦
指示植物
第十九页，讲稿共二十六页哦
CMV病毒感染的植株叶片
第二十页，讲稿共二十六页哦
3、抗血清鉴定法：利用抗原和抗体的特异性反应原理进行病毒鉴定。用已知病毒的抗血清（antiserum）鉴定未知病毒。

近年来又在此基础上发展出酶联免疫法（Enzyme Linked Immunosorbent Assay，ELISA），方法是将抗原固定在支持物上，加入待检血清，然后加入酶（过氧化物酶或碱性磷酸酶）标记的抗体，使待检血清与对应抗原的特异性抗体结合，最后用分光光度计进行诊断。
第二十一页，讲稿共二十六页哦
酶联免疫法进行病毒鉴定
第二十二页，讲稿共二十六页哦
4、电子显微镜检测（Electronmicroscope）：采用电子显微镜对病毒的薄样品（约1－－100um）或纯化的病毒悬液中进行病毒的直接观察。
5、RT－PCR检测（Reverse Tran