粗多糖检测方法(葡萄糖)(共2页).doc

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多糖的检测方法
粗多糖的苯酚-硫酸分光光精选优质文档-----倾情为你奉上
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多糖的检测方法
粗多糖的苯酚-硫酸分光光度测定法

多糖经乙醇沉淀分离后，去除其他可溶性糖及杂质的干扰，再与苯酚 - 硫酸作用成橙红色化合物，其呈色强度与溶液中糖的浓度成正比，在485nm波长下比色定量。

（1）离心机：4000r/min。
（2）离心管：50ml或具塞15ml。
（3）分光光度计。
（4）水浴锅。
（5）旋涡混合器。

实验用水为双蒸水，所用试剂为分析纯级。
(1) 无水乙醇。
(2) 80%（v/v）乙醇溶液。
(3) 葡萄糖标准液：，并定容至50ml，此溶液1ml含10mg葡萄糖，用前稀释100倍为使用液（）。
(4) 5%苯酚溶液（W/V）：，加水溶解并稀释至100ml，混匀。溶液置冰箱中可保存1个月。
(5) 浓硫酸（）。
(6) （）：（）（）磷酸二氢钠混合。

（1）样品提取：~，置于100ml容量瓶中，加水80ml左右，于沸水浴中加热1小时（如保健食品添加的已是多糖提取物，则加热15min），冷却至室温后补加水至刻度（v1）,混匀后过滤，弃去初滤液，收集余下滤液供沉淀粗多糖。
(2)沉淀粗多糖：准确吸取上滤液（或液体样品）（V2） ，置于50ml离心管中（），加入无水乙醇20ml（或8ml），混匀，于4℃冰箱静置4小时以上，以4000r/min离心5min，弃去上清液，残渣用80%（V/V）乙醇溶液数毫升洗涤，离心后弃去上清液，反复操作3次。残渣用水溶解并定容至10~25ml（V3）（根据糖浓度而定）。
(3)标准曲线的绘制：准确吸取葡萄糖标准使用液0ml、、、、、、（相当于葡萄糖0mg、、、、、、）置于25ml比色管中，，加入5%，在旋涡混合器上混匀，小心加入浓硫酸10ml，在旋涡混合器