法医病理学-组织切片制作.ppt

法医病理学-组织切片制作
适用于年终总结/工作计划/述职报告/策划方案等
2020
固定的目的：
1. 阻止死后变化，防止组织的自溶与腐败。
2．保存组织的结构及成份。
3．媒染作用，使不同的组织成份对染料有不同
亲和力，使ml至95ml；80％酒精：95％酒精80ml加蒸馏水至95ml，依次类推。
（2）丙酮
脱水作用与酒精相似，虽其脱水作用比酒精强，但可引起组织块的收缩较，价钱较贵，故不宜用于一般组织脱水，它即有脱水作用又有透明作用，用丙酮固定的材料要小，脱水1～8小时即可。
（五）透明
目的：因为酒精与蜡不能相交换需要借助石蜡诱导剂的媒介作用。石蜡诱导剂渗入之后组织块往往呈现透明状态，习惯上将石蜡诱导剂渗入组织内的过程叫透明，用于透明的试剂称为透明剂。
透明时间：根据组织块的大小而定，一般20分钟至1小时。组织块过大可延长透明时间，透明好的材料如同油炸的感觉呈透明状。
透明剂：二甲苯、氯仿、甲苯、香柏油等。最常用二甲苯。
二甲苯：无色透明有机溶媒，有很强的刺激气味，易挥发，长期接触对粘膜有刺激作用，透明作用很强，可使组织收缩变形，透明时间不宜过长。如遇到组织块内部或某一个部位呈白色混浊状态时说明脱水不彻底，如果造成透明不彻底应退回到100％酒精中重新透明。
六、浸蜡与包理：
浸蜡的目的：为了能制作薄切片做准备，将透明好的组织块浸到融化的石蜡中，使石蜡渗透到组织细胞内，将组织细胞内的二甲苯完全彻底地取代出来，再用石蜡将组织包埋，冷却后，切成小块，修整好切面，这一过程为浸蜡与包埋。
具体操作：
（一）浸蜡
石蜡箱温度58℃～60℃左右，内有标明Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的蜡杯或蜡缸，从透明的二甲苯Ⅱ取出组织块，放入Ⅰ号蜡杯中2h～3h，再将组织块移入Ⅱ号蜡杯（纯蜡）2h～4h，再移入Ⅲ号蜡杯中（纯蜡）半天或者稍降蜡箱温度过夜，最后用融化的纯蜡作为包埋用的蜡。
注意：浸蜡时蜡杯不要颠倒顺序使用，以免脱二甲苯不彻底。如遇特殊情况需要延长浸蜡时间时可降低蜡箱温度或关闭蜡箱，需要时再开。温度越高，时间越长组织块收缩越严重，而且材料脆而不易制作切片。
（二）包埋：
包埋方法：石蜡包埋法、火棉胶包埋法、炭蜡包埋法、明胶包埋法、环氧树脂包埋法（电镜用）等。
步骤：纯石蜡溶解后（60℃）倒入包埋框内或纸盒内，迅速将浸好的组织块的切面向下、放平，依次摆入框内，待蜡逐渐冷却凝固后，将组织材料凝结在石蜡内。然后按组织块大小切成蜡块，。
注意：如果操作不熟练或在冬天包埋时最好用酒精灯。在材料包入石蜡之前，稍在酒精灯上过一下加温，以免材料与包埋蜡温度不符造成材料与包埋蜡间遗留缝隙，切片时产生分离现象。
蜡块背面要标记例号等字样的纸片，以长期保存。切完的蜡块表面要用烫片板，烫一下封闭材料面，隔离空气接触可长期保存材料不干。
（三）蜡的种类：
1．蜂蜡：是动物体内提取的蜡，颜色微黄故也称为黄蜡，溶点在54℃左右。特点是润滑带有粘性，冬天用量比夏天多。
2．石蜡：是由矿物质中提取，质地较疏松，色白。根据蜡的溶点不同又可分为软蜡及硬蜡。
软蜡：50℃以下的石蜡。硬蜡：溶点在50℃以上的石蜡。两种蜡可以混合在一起使用。石蜡熔点有52℃～54℃，56℃～58℃，58℃～60℃，60℃～62℃。
七、切片
工具：切片刀、磨刀机、切片机、水浴锅，干燥箱等；载薄片、手术刀、毛笔、弯镊子、托盘、大平皿（展片使用）、烤片盒、蛋白甘油等。
（一）切片机种类：轮转式切片机、滑行式切片机（滑动式）、冰冻切片机、超薄切片机等（电镜用）。
（二）构造：由四个基本部分组成：刀台、标本台、旋转轮、控制切片厚度的微动装置（标有 l～25或1～50的数字，每一数字代表一个微米）。根据需要调节厚度，一般采用5μm～7μm。
蛋白甘油：用鸡蛋清（不要鸡蛋黄）用玻璃棒充分搅拌后用数层纱布过滤后加等量的甘油搅均匀加数颗麝香草酚。
（三）切片制作
1．将洁净的载薄片涂薄层蛋白甘油放人烤片盒内待用。
2．将切割修整好的蜡块用普通刀片先将蜡块的组织切面暴露出来修平，固定在切片机上的标本台上并拧紧螺旋。
3．蜡块先固定在标本台上切片刀固定于刀台上，拧紧固定刀的螺丝同时调整刀与蜡块的切片距离使刀与蜡块贴紧后再固定刀台螺丝，刀的角度为25度角。
4．调节微动装置，调至切片所需厚度（一般为 5μm～7μm）。
5．修材。右手握旋转轮摇把按顺时针方向均匀地摇动直到组织块切面完整暴露为止。
（四）展片
水浴锅上平皿内水温升至45℃左右，将已切好的连续薄片切分成数片，放在水面，轻漂，水中展平，未展平时可用小弯镊子轻轻展开，然