常用缓冲液及培养基配方.doc

常用缓冲液及培养基配方 LB 液体培养基: Bacto- 蛋白胨 10g 酵母抽提物 5g 氯化钠 10g 加 950ml 蒸馏水溶解,用 5N 氢氧化钠调 pH 至 , 定容至 1000ml , 高压灭菌后保存。 LB 固体培养基: 每升 LB 液体培养基中加入 12g 琼脂粉,高压灭菌后保存。 SOB 液体培养基 Bacto- 蛋白胨 20g 酵母抽提物 5g NaCl 加 950 ml 水溶解, 加入 250mmol/L KCl 溶液 10ml ,用5N NaOH 调 pH 至 , 定容至 1000 ml ,高压灭菌后保存。使用前加入 5ml 经灭菌的 2mol/ L MgCl 2。 SOC 液体培养基 SOB 中加入经灭菌的葡萄糖溶液至终浓度为 20mmol/L 。麦康凯固体培养基每 1000ml 水中加 52g 培养基粉,煮沸溶解后分装,高压灭菌。 NA 固体培养基牛肉浸膏 3g 酵母浸膏 1g 蛋白胨蔗糖琼脂粉 5g 10g 15g 加 950ml 蒸馏水溶解,调 pH 至 ,定容至 1000ml ,高压灭菌后保存。 TB 培养基: 将下列组分溶解在 水中: Bacto- 蛋白胨 12g 酵母抽提物 24g 甘油 4ml 各组分溶解后高压灭菌。冷却到 60℃,再加 100ml 灭菌的 170mmol/L KH 2 PO 4/ mol/L K 2 HPO 4 的溶液。高压灭菌或用 的滤膜过滤除菌。溶液Ⅰ葡萄糖 g 50mmol/L 1mol/L Tris · Cl() 20mmol/L EDTA() 5ml 10mmol/L 调 pH 至 后,用水定容至 250 ml ,高压灭菌后保存。溶液Ⅱ 10 mol/L NaOH 2ml 10% SDS 10ml 用水定容至 100 ml ,现配现用。溶液Ⅲ 5 mol/L 醋酸钾 60ml 冰醋酸 水 高压灭菌后保存。高盐 TE 缓冲液 10 mmol/L Tris. C l, pH * EDTA, pH * 1mol/L NaCl 于室温保存(可在几年内保持稳定) CTAB 抽提液 2% ( w/v ) CTAB( 古立烷基三乙基溴化铵) 100 mmol/L ,pH * NaCl 于室温保存(可在几年内保持稳定) CTAB/N aCl 溶液( 10% CTAB/ NaCl ) 在 80 mlH 2O 中溶解 NaCl, 缓慢加入 10一 CTAB ( 十六烷基三乙基溴化铵), 同时加热并搅拌。如果需要,可加热至 65℃溶解。定容终体积至 100 ml. CTAB 沉淀液 1% ( w/v ) CTAB 50mmol/L , pH 10mmol/L EDTA, PBS 缓冲液: 十二水磷酸氢二钠 15g 磷酸二氢钾 1g 氯化钠 40g 氯化钾 1g 定容至 5000ml, 调 pH 至 。 ELISA 包被液: 碳酸钠 碳酸氢钠 定容至 1000ml ,调 pH 至 9