土壤过氧化氢酶、过氧化物酶、磷酸酶、蔗糖酶、脲酶测定方法.docx

土壤酶活性测定方法
土壤脉酶的测定方法（苯酚钠一次氯酸钠比色法）一、原理
脉酶存在丁大多数细菌、真菌和高等植物里。它是一种酰胺酶作用是极为专性的，它仅能水解尿素，水解的最终产物是氨和二氧化碳、水。土壤脉酶活性与土壤的微生物数量、.
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/LNaOH溶液稀释至200ml.
2）%磷酸苯二钠（用缓冲液配制）3）氯代二漠对苯酿业胺试剂：，用
10ml95%乙醇溶解，贮丁棕色瓶中，存放在冰箱里。保存的黄色溶液未变褐色之前均可使用。
4）甲苯5）%硫酸铝溶液6）酚标准溶液
酚原液：取1g重蒸酚溶于蒸僻水中，稀释至1L,存于棕色瓶中
酚工作液():取10ml酚原液稀释至1L。

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三、操作步骤
标准曲线绘制：取0、1、3、5、7、9、11、13ml酚工作液，置于50ml容量瓶中，，显色后稀释至刻度。30min后，在分光光度计上660nm处比色。以显色液中酚浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。
称2g土样置于200ml三角瓶中，加5滴甲苯，轻摇15min后，%磷酸苯二钠(酸性磷酸酶用乙酸盐缓冲液；中性磷酸酶用柠檬酸盐缓冲液；碱性磷酸酶用硼酸盐缓冲液)，仔细摇匀后放入恒温箱，37C下培养24h。%硫酸铝溶液并过滤。吸取3ml滤液于50ml容量瓶中，然后按绘制标准曲线方法显色。用硼酸缓冲液时，呈现蓝色，于分光光度计上660nm处比色。
注意事项：
1、每一个样品应该做一个无基质对照，以等体积的蒸僻水代替基质，其他操作与样品实验相同，以排除土样中原有的氨对实验结果的影响。
2、整个实验设置一个无土对照，不加土样，其他操作与样品实验相同,以检验试剂纯度和基质自身分解。
3、如果样品吸光值超过标曲的最大值，则应该增加分取倍数或减少培养的土样四、结果计算
以24h后1g土壤中释放出的酚的质量（mg）表示磷酸酶活性。
磷酸酶活性=（a样品一a无土一a无基质）XVXn/m
式中：a样品为样品吸光值由标准曲线求得的酚毫克数；a无土为无土对照吸光值由标准曲线求得的酚毫克数；a无基质为无基质对照吸光值由标准曲线求得的酚毫克数；V为显色液体积；n为分取倍数；m表示烘十土重土壤蔗糖酶活性测定（3,5-二硝基水杨酸比色法）一、原理
蔗糖酶与土壤许多因子有相关性，如与土壤有机质、氮、磷含量、微生物数量及土壤呼吸强度有关。一般情况下，土壤肥力越高，蔗糖酶活性越高。蔗糖酶酶解所生成的还原糖与3,5-二硝基水杨酸反应而生成橙色的3-氨基-5-硝基水杨酸。颜色深度与还原糖量相关，因而可用测定还原糖量来表示蔗糖酶的活性。
二、试剂
1）8%蔗糖溶液
2）：1/15M磷酸氢二钠（。溶于1L蒸僧水中）
（）。
3）甲苯
4）3,5-二硝基水杨酸试剂（DNS试剂）
，溶于20ml2mol/LNaOH和50ml水中，再加30g洒石酸钾钠，用水稀释定容至100ml（保存期不过7天）。
5）标准葡萄糖溶液：预先将分析纯葡萄糖置80C烘箱内约12小时。，用蒸僻水溶解后，移至100mL容量瓶中，定容，摇匀。即为5mg还原糖/mg的溶液。冰箱中4C保存期约一星期，若该溶液发生混浊和出现絮状物现象，则应弃之，重新配制。
三、操作步骤
（1）标准曲线绘制
分别吸葡萄糖标准溶液0、、、、、，再补加蒸僻水至1mL,加DNS试剂3mL混匀，于沸水浴中准确反应5min（从试管放入重新沸腾时算起），取出立即泠水浴中冷却至室温。将溶液转移至100ml容量瓶中，定容。以空白管调零在波长508nm处比色，以吸光度值为纵坐标，以葡萄糖浓度为横坐标绘制标准曲线。
（2）土壤蔗糖酶测定
称取2g土壤，置于50mL三角瓶中，注入15ml8%蔗糖溶液，。摇匀混合物后，放入恒温箱，在37C下培养24h。到时取出，迅速过滤。从中吸取滤液1ml，注入小试管中，