土壤过氧化氢酶、过氧化物酶、磷酸酶、蔗糖酶、脲酶测定方法.docx

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土壤酶活性测定方法
土壤脉酶的测定方法〔苯酚钠一次氯酸钠比色法〕
一、 原理
脉酶存在丁大多数细菌、
性的,它仅能水解或
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醋酸钠溶液稀 释至1L.
柠檬酸盐缓冲液PH
柠檬酸溶液： C 6H7O8 溶至 1L.
磷酸氢二钠溶液 ： 2O 或者
2O 溶至 1L.
磷酸氢二钠溶液稀
释至100ml.
硼酸盐缓冲液PH
硼砂溶液 硼砂溶至1L.
NaOH 溶液 8g NaOH 溶至 1L.
取50ml 硼砂溶液加 23ml NaOH 溶液稀释至
200ml.
2〕 %磷酸苯二钠〔用缓冲液配制〕
3〕 氯代二漠对苯酿业胺试剂：,用10ml 95% 乙醇溶解,贮丁棕色瓶中, 使用.
4〕 甲苯
5〕 %硫酸铝溶液 6〕酚标准溶液
酚原液：取1g重蒸酚溶于蒸僻水中,稀释至1L,存于棕色瓶中
酚工作液( ):取10ml酚原液稀释至1L.
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mol/L 硼酸：
mol/L 硼砂：
.
三、操作步骤
标准曲线绘制：取0、1、3、5、7、9、11、13ml酚工作液,置于50ml 容量瓶中,每瓶参加5ml , , 酚浓度为横坐标,吸光值为纵坐标,绘制标准曲线.
称2g 土样置于200ml三角瓶中,加5滴甲苯,轻摇15min后,参加20ml %磷酸苯二钠(酸性磷酸酶用乙酸盐缓冲液；中性磷酸酶用柠檬酸盐缓冲液； 碱性磷酸酶用硼酸盐缓冲液),仔细摇匀后放入恒温箱,37 后在培养液参加40ml % 瓶中,,呈现蓝色,于分光光 度计上660nm 处比色.
考前须知：
1、每一个样品应该做一个无基质对照,以等体积的蒸僻水代替基质,其 他操作与样品实验相同,以排除土样中原有的氨对实验结果的影响.
2、整个实验设置一个无土对照,不加土样,其他操作与样品实验相同,
以检验试剂纯度和基质自身分解.
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3、如果样品吸光值超过标曲的最大值,那么应该增加分取倍数或减少培养 的土样
四、结果计算
以24h后1g 土壤中释放出的酚的质量〔mg 〕表示磷酸酶活性.
磷酸酶活性=〔a样品一a无土一 a无基质〕XVXn/m
式中：a样品为样品吸光值由标准曲线求得的酚毫克数；
a无土为无土对照吸光值由标准曲线求得的酚毫克数；
a无基质为无基质对照吸光值由标准曲线求得的酚毫克数；
V为显色液体积；
n为分取倍数；
m表示烘十土重
土壤蔗糖酶活性测定〔3,5-二硝基水杨酸比色法〕
一、 原理
蔗糖酶与土壤许多因子有相关性,如与土壤有机质、氮、磷含量、微生物 ,土壤肥力越高, 糖酶酶解所生成的复原糖与 3,5-二硝基水杨酸反响而生成橙色的 3-氨基
-5-,因而可用测定复原糖量来表示蔗 糖酶的活性.
二、 试剂
1〕 8%蔗糖溶液
2〕 磷酸缓冲溶：1/15M 磷酸氢二钠〔 Na 2HPO4 于1L蒸僧水中〕 磷酸二氢钾〔 KH 2PO4溶于1L蒸僧 水中〕.
3〕 甲苯
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4〕 3,5-二硝基水杨酸试剂〔DNS试剂〕