欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光RT-PCR检测方法的建立.pdf

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A nim a lH usbandry & V ete rinary M ed icine
2008
V o l
40
N o
7
欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光 RT
PCR
检测方法的建立
鲁韦韦1, 2, 唐泰山 2, 姜
平1* ,
张常印 2, 王凯民2
( 1. 南京农业大学农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室, 江苏南京
210095;
2. 江苏出入境检验检疫局, 江苏南京
210001)
摘要: 根据欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒( PRRSV ) 基因序列, 设计 E1 和 E6 2套 PCR引物和 TaqMan荧光探针, 建立 E1和 E 6荧光 RT
PCR
方法, 用于检测 PRRSV。反应条件优化后, 用 10 倍倍比稀释的质粒 DNA、 cDNA 进行 PCR扩增以检测其灵敏度, 同时对猪瘟( CSFV )、猪伪狂
犬( PRV ) 等 7种病毒进行特异性检测。结果显示, 建立的 E 1和 E6 荧光 RT
PCR 可以检出欧洲型 PRRSV, 敏感性依次为 616和 216 个拷贝的
PRRSV重组质粒 DNA, 而 C SFV等非 PRRSV均为阴性。建立的 E1、 E6荧光 RT
PCR具有快速、灵敏、准确、低污染等优点, 可作为检测欧洲型
PRRSV的技术储备。
关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒; 荧光 RT
PCR; 检测
中图分类号: S852
65
文献标识码: A
文章编号: 0529
5130( 2008) 07
0026
05
R eal
tim e RT
PCR assays for the detection of European strain of porcine
reproductive and respiratory syndrom e virus
LU W ei
w e i1, 2, TANG Tai
shan2, JIANG Ping1* ,
ZHANG Chang
yin2, WANG Ka i
m in2
( 1. K ey Laboratory o fAn im al D isease D iagnostics and Immuno logy, M in istry of Agricu lture,
N an jing Agricu ltura lU niversity, Nan jing 210095, Ch ina;
2. Jiangsu Entry
Ex it Inspection and Quaran tine Bureau, Nan jing 210001, Ch ina)
Abstrac:t Tw o pairs o f real
tim e RT
PCR prim ers and probes, E1 and E6, were designed and synthesized based on the nuc leotide se
quences of European stra in of porc ine reproductive and respiratory syndrom e v irus ( PRR SV ). A fter the reactio