实验大肠菌群的检验.ppt

实验大肠菌群的检验
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实验目的
掌握鉴别大肠菌群的方法。
掌握以最大概率数法测定大肠菌群数量的方法。
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实验原理
大肠菌群指一群能实验大肠菌群的检验
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实验目的
掌握鉴别大肠菌群的方法。
掌握以最大概率数法测定大肠菌群数量的方法。
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实验原理
大肠菌群指一群能发酵乳糖、产酸产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。该菌主要来源于人畜粪便，以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，推断食品有否被肠道致病菌污染。
食品中大肠菌群以100ml 检样内大肠菌群最可能数（MPN）表示。
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实验设备
恒温培养箱：（36±1）℃
显微镜
培养皿
试管、移液管、三角烧瓶、小倒管
天平
载玻片
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实验试剂
乳糖胆盐发酵管：
20g蛋白胨、5g 猪胆盐及10g乳糖溶于1L水中，校正pH为7 .4，加25ml溴甲酚紫指示液( g/L)，分装每管20 ml, 并放入一个小倒管，115℃高压灭菌20 min。
伊红美蓝琼脂平板：
10g蛋白陈、2gK2HPO4及17g琼脂溶解于1L水中，，分装于锥形瓶内，121℃高压灭菌15min。临用时加人10g乳糖并加热溶化琼脂，冷至50～55℃。加人20mL伊红溶液（20g/L)和10ML美蓝溶液（）摇匀，倾注平板。
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乳糖发酵管：
将20 g蛋白陈和10g乳糖溶于1L水中，，加入25mL溴甲酚紫指示液()，按检验要求分装，并放人一个小倒管，加热至115℃高压灭菌15 min
灭菌生理盐水：％
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革兰氏染色液：
①结晶紫染色液：
1g结晶紫溶于20mL95%乙醇，与80mL草酸铵溶液（10g/ L)混合，摇匀。
②革兰氏碘液：
1g碘与2g碘化钾混合后，用少量水溶解，稀释至300 mL。
③沙黄复染液：
%乙醇中，然后用90ml水稀释，混匀。
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实验内容与步骤
1）检样稀释（无菌操作）
①将25mL（或g）检样置于含225mL灭菌生理盐水的灭菌玻璃瓶，充分振摇（固体检样用匀浆器，用8000－10000r/min的速度处理1 min）制成1：10的均匀稀释液。
②用1mL灭菌吸管吸取1：10稀释液1mL，注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内，混匀，制成1 ：100的稀释液。
③另取1mL灭菌试管，按②操作依次做10倍递增稀释液，每稀释一次，换用一支1 mL灭菌试管。
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2）乳糖发酵实验
接种2mL待检样品于乳糖胆盐发酵管内。接种3个稀释度，每一稀释度接种3管，置（36土1)℃温箱内培养（24士2) h。如所有乳糖胆盐发酵管都不产气，则可报告为大肠杆菌群阴性，如有产气者，则按下列程序进行。
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3）分离培养
将产气的发酵管分别转接在伊红美蓝琼脂平板上，置（36士1)℃恒温箱内培养18一24 h。取出，观察菌落形态，并做革兰氏染色和证实试验。
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4）证实试验
在上述平板上，挑取可疑大肠菌群菌落1一2个进行革兰氏染色，同时接种乳糖发酵管，置（36士1)℃恒温箱内培养（24士2) h，观察产气情况。凡乳糖产酸产气、革兰氏染色为阴性的无芽袍杆菌，即可报告为大肠菌群阳性。
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实验报告
根据证实为大肠菌群阳性的管数，查MPN检索表，报告每100mL（或g）大肠菌群的MPN。
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注：
①本表采用3个稀释度：1ML(g)，(g） mL (g)。每稀释度3管。