高效液相色谱概述.ppt

高效液相色谱法(HPLC)High Performance Liquid Chromatography
第一节 概述
一、 高效液相色谱法及其特点
1. 高效液相色谱法（HPLC） ：以经典液相色谱法为基础，引入气相色谱的 TCD、 FID、ECD、FPD和NPD
HPLC: UV、DAD、FD、RID········

（1）分离效能高 （2）选择性高 （3）灵敏度高
（4）分析速度快 （5）应用范围广
二、高效液相色谱法在药物分析中的应用
色谱法具有分离分析两种功能，因此在药物分析
中，HPLC已成为对各类药物及其制剂进行鉴别、检查、
杂质分离及含量测定的主要手段。
中国药典：1953～2005年共出版发行七版
滴定分析：各版均占50％以上。
UV:用于含量测定、含量均匀度或溶出度测定。
IR：用于原料药鉴别（2000版444个品种）
85版开始收载HPLC法－7项
90版－76项；2000版200多项；2005版－1000多项
美国药典委员会（USPC）成立于1820年，至今
近200年。出版发行了25版药典。
75年（19版）将HPLC载入药典
20版－62项；21版－363项；22版－871项；
23版－1188项；
24版－含量测定方法：1386项
鉴别：519项
杂质检查：206项

如今：在评价世界各时，HPLC法已
成为反映各国药典先进性的重要指标之一。
三、高效液相色谱法的分类

液－固色谱；液－液色谱

（1）吸附色谱（Adsorption Chromatography）
（2）分配色谱（Partition Chromatography ）
（3）离子色谱（Ion Chromatography ）
（4）空间排阻色谱（Size Exclusion Chromatography )
（5）亲和色谱（Affinity Chromatography ）
（6）手性色谱（Chiral Stationary Chromatography ）
3. 按流动相压强分
（1）高效液相色谱法（HPLC）
（2）超高效液相色谱法（UPLC）
四、高效液相色谱法的应用范围和局限性
1. 应用范围
高效液相色谱法适于分析高沸点、受热不稳定易
分解、分子量大、不同极性的有机化合物；生物活性
物质和多种天然产物；合成和天然高分子化合物。
涉及石油化工产品、食品、药品、生物化工厂品
及环境污染物。约占全部有机物的80％。
2. 方法的局限性
（1）使用多种溶剂为流动相，成本高，污染环境。
（2）缺少通用检测器
（3）不能完全替代气相色谱
（4）不适于分析受压分解、变性的具有生物活性
的生化样品分析
综上，高效液相色谱法与其他分析方法一样，
不是尽善尽美的。作为从事药物分析工作的人们在
掌握高效液相色谱法的特点、应用范围和局限性的
前提下，充分利用高效液相色谱法的特点，就可在
解决实际分析任务中发挥重要作用。
第二节 高效液相色谱法的基本理论
一、高效液相色谱参数
1. 定性参数
t R、t0 、

σ、 w1/2、w
w =4σ 或 W=

K=CS / Cm k = ms / mm = CS VS / CmVm = K. VS / Vm
4. 分离参数
R= 裸露面积≥％
R=≥％ R≥
二、高效液相色谱法的基本理论
色谱分析法的目的是将样品中各组分彼此分离，达到
可以测定的目的，然后用合适的方法进行定性、定量分析。
对于最难分离的物质对，分离有三种情况：
由三种分离情况可得出： ，tR差别应足够大。即两组分迁移速度 不同－ －取决色谱体系热力学过程。
，色谱峰应足够窄。峰宽窄的本质是组分在色谱柱内的扩散及在两相中达到分配平衡的速度－－取决色谱体系动力学过程
（一）塔板理论
1. 前提：四个基本假设
2. 解决的问题：
（1）较好的描述色谱流