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最新植物生理指标测定方法.docx


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实验一 植物叶绿素含虽的测定(分光光度法)
(张宪政,1992)
一、 原理
根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收,利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光
度,即 cm*g) =SQ=测定电导率/称取水平
或 K (u& cm*g*ml) =SQ=测定电导率/称取水平*量取体积
(2) 相对电解质渗出率.
电解质渗出率(% ) = L1 (浸泡液电导率)/ L2 (煮沸后电导率)X 100 电解质渗出率(%)= L1(浸泡液电导率卜本底电导率/[ L2 (煮沸后电导率)-本底电导率]X 100 式中:L1:组织杀死前外渗液的电导值;L2组织杀死后外渗液的电导值.
注:1、事先测定水的电导率
2、用吸水纸吸干探头的水分
实验三 植物体内游离脯氨酸含虽的测定
一、 目的
在逆境条件下(旱、热、冷、冻),植物体内脯氨酸的含量显著增加,植物体内脯氨酸含 量在一定程度上反映了植物的抗逆性, ,由丁脯氨酸亲水性极强,能稳定原生质胶体及组织 内的代谢过程,因而能降低冰点,,植物组织中脯氨 酸增加,可提升植物的抗冷性,因此,亦可作为了抗冷育种的生理指标.
二、 原理
磺基水杨酸对脯氨酸有特定反响,当用磺基水杨酸提取植物样品时,脯氨酸便游离丁磺 ,前三酮与脯氨酸反响,生成稳定的红色化 合物,再用甲苯处理,那么色素全部转移至甲苯中, 520nm波长下测定吸光度,即可从标准曲线上查出脯氨酸的含量.
三、 材料、仪器及试剂
试剂及配制:
(1) %酸性前三酮溶液配制: 30ml冰醋酸和20ml 6mol - L 1 磷酸中(),搅拌加热(70C)溶解,贮丁 4C冰箱中,2-3日有效.
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(2) 3%磺基水杨酸配配制: 100ml.
(3) 10^i g - ml-1脯氨酸标准母液配制:精确称取 20mg脯氨酸,倒入小烧杯内,用少 量蒸僻水溶解,再倒入200ml容量瓶中,加蒸僻水定容至刻度(为了 100H g - ml-1脯氨酸母 液),再吸取该溶液10ml,加蒸僻水稀释定容至100ml,即为了10 H g - ml-1脯氨酸标准液.
四、实验步骤
1、脯氨酸标准曲线的制作
,编号,按下表配制每管含量为了 0〜12^ 剂后,置丁沸水浴中加热 ,在 520mn<长处
测定吸光度(A)值.
0
1
2
3
4
5
10卜g・-m脯氨酸标准液(ml)
0





蒸僻水(ml)
2





冰醋酸(ml)
2
2
2
2
2
2
3涮基水杨酸
2
2
2
2
2
2
%酸性前三酮(ml)
4
4
4
4
4
4
每管脯氨酸含量(从g)
0
2
4
6
8
10

以1〜5号管脯氨酸含量为了横坐标,吸光度值为了纵坐标,绘制标准曲线.
样品的测定

〜 20ml试管+ 10ml 3 %磺基水杨酸溶液t沸水浴10min (提取过 程中要经常摇动)t冷却过滤丁干净的试管中t脯氨酸提取液.

吸取酶提取液2ml + 2ml H2O + 2ml冰醋酸+ 4ml %酸性前三酮t沸水浴30min^溶 液呈红色t冷却t取上层液丁比色杯 520mnft测定吸光度(A)值.
五、计算结果
从标准曲线上查出样品测定液中脯氨酸的含量,按下公式计算样品中脯氨酸含量:
XX提取液总量(ml)
脯氨酸含量(H )=
样品鲜重(g) x测定时提取液用量(ml)
公式中:X 一从标准曲线中查得的脯氨酸含量( ^2
实验四 植物体内丙二醛含虽的测定
一、原理
丙二醛(MDA是由丁植物官衰老或在逆境条件下受伤害,其组织或器官膜脂质发生过氧 , 通常利用硫代巴比妥酸(TBA)在酸性条件下加热与组织中的丙二醛产生显色反响, 生成红棕色
的三甲川(3、5、5一三甲基恶□坐2、4 一二

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  • 时间2022-04-23
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