肾功能不全试验的实验报告.ppt

肾功能不全试验的实验报告
实验步骤
观察：24h后，比较两组动物的一般状态、活动情况与尿量。
家兔称重，耳缘静脉注射25％氨基甲酸乙酯4．0ml／kg，待动物麻醉后，固定于兔台。
角膜反射
夹肢反射
实验步骤
肾功能不全试验的实验报告
实验步骤
观察：24h后，比较两组动物的一般状态、活动情况与尿量。
家兔称重，耳缘静脉注射25％氨基甲酸乙酯4．0ml／kg，待动物麻醉后，固定于兔台。
角膜反射
夹肢反射
实验步骤
家兔心脏采血3~5ml置于一干燥管中（不抗凝），放置10min后，3000r/min离心15min，小心吸取血清置于另一干燥管中，备测血肌酐
实验步骤
如果心脏采血失败，则颈总动脉采血
颈部正中剪毛，切开皮肤，分离左侧颈总动脉，在动脉下穿两根丝线，用一根丝线结扎动脉的远心端，近心端用动脉夹夹闭，在结扎线下方的动脉壁上剪一小斜口，然后向心脏方向插入动脉导管放血3ml备测血肌酐
实验步骤
分离右侧颈外静脉，插管用于输液。输液速度一定要慢
下腹部正中剪毛，在耻骨联合上约1．5cm处做切口，长约4cm，暴露膀胱，用注射器收集2ml尿液于试管中，做尿肌酐检查。
实验步骤
在膀胱底部，找出两侧输尿管，并分离之。在近膀胱端结扎输尿管，稍等片 刻，待其略充盈后，用眼科剪剪一小口，向肾脏方向插入一细塑料管(塑料管事先用肝素冲洗或充满肝素)，结扎并固定，用于收集尿液。
实验步骤
酚红排泄率测定：
1)两组家兔分别耳缘静脉注射o．6％酚红溶液(1ml／kg)，接着从颈外静脉插管处注射20％葡萄糖溶液(30ml／kg)。收集从开始注射酚红起15min或30min的尿液。换算成单位时间的尿量(ml／min)。
实验步骤
将收集的尿液倒入500ml量筒内，加10％NaOH lOml，用自来水补充至500ml处，混匀后，取出适当量放入与比色管口径相同的试管中与标准比色管比较，得出15min或30min内肾脏酚红排泄率。
实验步骤
肾脏酚红排泄率：是反映肾血流量与肾小管排泌功能的指标。正常情况下从静脉注入酚红后15min或30min，肾脏酚红排泄率分别＞30%与＞45%。
实验步骤
血清和尿液肌酐含量测定——苦味酸沉定蛋白法
原理：在碱性条件下，苦味酸与（血、尿中）肌酐作用，生成黄红色苦味酸肌酐，使溶液呈色后进行比色测定；然后加醋酸，在酸性环境中，黄红色的苦味酸肌酐被清除，非肌酐物质（假肌酐）呈色，两者比色之差为血及尿中肌酐。按表1、表2的操作步骤测定血清及尿液肌酐。
表1 血清肌酐测定
单位（ml）
标准管
测定管
空白管
肌酐标准应用液（）

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血清
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蒸馏水
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碱性苦味酸



实验步骤
混匀，37OC水浴30 min，以510nm波长比色，空白管调零，读OD值，然后，各管加50%醋酸液两滴，放置6min后，在测OD’值。计算：
[Cr]p(mg%)=OD测－OD’测/ OD标－OD’标××100
正常值:～%(1mg%=mol/L)。
表2 尿肌酐测定
单位（ml）
测定管
标准管
空白管
尿液（原尿或1：50稀释）

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_
尿肌酐标准应用液（）
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_
蒸馏水
_
_

碱性苦味酸
2
2
2
12．5%NaoH



实验步骤
混匀，放10min后加蒸馏水6。0ml，摇匀，以530nm波长比色，空白管调零，读OD值。计算：
[Cr]u(mg%)=OD测/OD标××100ml/
实验步骤
尿肌酐/血肌酐的意义：器质性肾衰时比值＜20；功能性肾衰时比值＞40。
内生肌酐清除率(Ccr)：
能较准确的反映肾小球滤过率(GFR)
Ccr=[Cr]尿×尿量（ml/min）/[Cr]血
为此，实验步骤收集尿液必须采集有“记录单位时间的尿量”的尿液样品做尿肌酐[Cr]尿测定，才能与血肌酐[Cr]血比，计算出GFR。肌酐能自由从肾小球滤过，在肾小管中很少被重吸收，但有少量是由近曲小管分泌。内生肌酐在血浆中的浓度相当低，近曲小管分泌的肌酐量可忽略不计，因此Ccr与菊粉清除率相近，可以代表肾小球滤过率。
实验步骤
肾形态学观察：处死家兔，取出肾脏，称肾重量，计算肾体比，比较两组家兔肾脏外形，纵向剖开肾脏，观察皮髓质条纹、色泽等。
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