紫外可见分光光度法测定不同品种柑橘皮中总黄酮含量.doc

紫外可见分光光度法测定不同品种柑橘皮中总黄酮含量
邓菊庆 柏春玲 杨学芳 摘要 [目的]研究不同产地5种柑橘皮中总黄酮含量。[方法]采用紫外分光光度法测定5种柑橘皮中总黄酮的含量,并对此方法进行精密度、稳定性、重复性和加样回收率醇(四川西陇化工有限公司);亚硝酸钠(无锡市亚泰联合化工有限公司,批号20180301);硝酸铝(北京康普汇维科技有限公司,批号20101001);氢氧化钠(上海国药集团化学试剂有点公司,批号20171210);所有试剂均为分析纯。
主要仪器。
可见光分光光度计(日立 U-3010);电热鼓风干燥箱(上海森信实验仪器有限公司);研钵(成都典锐实验仪器有限公司);电子天平(美国OHAUS Corp);离心机(上海安亭科学仪器厂);抽滤装置(上海领德仪器有限公司)。
方法
供试品溶液的制备[7-8]。
将新鲜柑橘皮切成细丝,分别装入贴有标签的1~5号烧杯中,放入80 ℃干燥箱烘干至恒重,钵磨成粉末。 g,置于100 mL容量瓶中,加入70%乙醇至30 mL,浸泡24 h后过滤,滤液用70%乙醇定容于100 mL容量瓶中,得到黄酮提取液。
标准品溶液的制备。精密称取100 ℃干燥至恒重的芦丁对照品5 mg,加入70%乙醇溶解后置于25 mL容量瓶中,加水定容, mg/mL蘆丁对照品溶液。 溶液显色。
精密量取对照品溶液和供试品溶液各1 mL,置于10 mL容量瓶中,先加入5% mL,摇匀,静置6 min,然后加入10%Al(NO3) mL摇匀,静置6 min,最后加入4% mL后,加水至容量瓶刻度线并摇匀放置15 min,以纯水加相应试剂为空白对照组,等待检测。
测定波长的确定。按照“”的显色方法,分别对照品溶液、供试品溶液和空白对照液(超纯水)显色后,于1 cm比色皿中,在200~800 nm波长进行扫描,发现对照品和样品溶液均显示在510 nm处有最大吸收峰,因此选定510 nm作为测定波长。
标准曲线的绘制。分别准确移取0、、、、、、 mL标准品溶液于10 mL容量瓶中,以纯水为空白对照,按照“”中方法显色后,于510 nm波长下迅速测定其余几组吸光度,以芦丁标准品浓度为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线,进行线性回归。
总黄酮含量的测定[7-8]。 mL,分别置于10 mL容量瓶中, mL超纯水,按照“”中方法显色后,以空白组为对照,迅速测出供试品溶液在510 nm吸光度的平均值,从线性相关方程计算出相应的黄酮浓度C,再换算成提取液中总黄酮的质量,计算总黄酮含量(X),其公式如下:
其中,C是根据标准曲线拟合方程计算,单位为g/L;V为黄酮提取液总体积(mL)。
2 结果与分析
芦丁标准曲线 以芦丁标准品浓度C为横坐标、吸光度为纵坐标绘制标准曲线,进行线性回归,得到回归方程为Y= 9X+ 9(