血糖含量的测定.ppt

血糖含量的测定
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一 实验目的
1、掌握无蛋白血滤液
2、血糖测定的原理和方法
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二 实验原理

血血糖含量的测定
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一 实验目的
1、掌握无蛋白血滤液
2、血糖测定的原理和方法
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二 实验原理

血液中所含的蛋白质常影响其他成分的测定，可以采用钨酸法除去蛋白质，制备无蛋白血滤液，供非蛋白氮、血糖、氨基酸、尿素等测定使用。
钨酸钠与硫酸混合生成钨酸。在pH值小于等电点的溶液中，钨酸与血液中的蛋白质分子的阳离子形成不溶性的蛋白沉淀，沉淀过滤或离心，上清液即为无色、透明、pH值约为6的无蛋白滤液。
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葡萄糖是一种多羟基的醛类化合物，具有还原性，与碱性铜试剂混合加热， 葡萄糖分子中的醛基被氧化成羧 [suō] 基，而铜试剂中的二价铜被还原成砖红色的氧化亚铜沉淀。氧化亚铜可以使磷钼[mù]酸还原成钼蓝，使溶液成蓝色。其生成蓝色的深度与血滤液中葡萄糖浓度成正比。通过分光光度计比色，即可求出血糖的含量。
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三 实验器材
仪器 ：锥形瓶；试管及试管架；离心机；电炉；血糖管；奥氏吸管；分光光度计。
试剂：动物全血；1／3mol·Ｌ　硫酸溶液；碱性铜试剂；磷钼酸试剂；％苯甲酸溶液；·mL
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四 实验步骤

吸取充分均匀的抗凝血1mL，擦净管外血液，缓慢放入锥形瓶或试管中。加入蒸馏水7mL，混匀，使完全溶血。·L 硫酸溶液1mL，充分混匀。此时血液由鲜红色变为棕色，静置5~10min，使其酸化完全。加入10%钨酸钠溶液1mL，边加边摇。当摇到不再产生泡沫时为止。说明蛋白质已经完全变性沉淀。放置5~10min，过滤或离心出去沉淀，既得无蛋白滤液（每毫升相当于1/10全血）
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2. 血糖测定
取3支血糖管按下表操作：
血糖管
空白管
标准管
测定管
无蛋白血滤液
蒸馏水
葡萄糖应用标准溶液
碱性铜试剂
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混匀，同时放入100℃沸水裕中煮8min，取出置冷水中冷却3min（切勿摇动血糖管）
磷钼酸试剂



混匀后放置2min（使二氧化碳气体逸出）
蒸馏水加至
25
25
25
试剂/mg
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用蒸馏水加至25刻度处后，混匀，空白管调零，在波长420nm处比色，记录各管光密度。计算求出每100mL血液中葡萄糖的质量（mg）
计算公式：
样品中的血糖（mg/100mL）=（测定管光密度/标
准管光密度）**100/
= （测定管光密度/标准管光密度）*100
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五 注意事项
一定要等水沸后，再放血糖管。准确加热8min，时间过久则呈色较深，反之则浅，均影响结果的准确性。为避免还原生成的亚铜被空气中的氧再氧化，冷却时切勿摇动血糖管。
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