血糖含量的测定.ppt

一实验目的
1、掌握无蛋白血滤液
2、血糖测定的原理和方法
二实验原理

血液中所含的蛋白质常影响其他成分的测定,可以采用钨酸法除去蛋白质,制备无蛋白血滤液,供非蛋白氮、血糖、氨基酸、尿素等测定使用。
钨酸钠与硫酸混合生成钨酸。在pH值小于等电点的溶液中,钨酸与血液中的蛋白质分子的阳离子形成不溶性的蛋白沉淀,沉淀过滤或离心,上清液即为无色、透明、pH值约为6的无蛋白滤液。

葡萄糖是一种多羟基的醛类化合物,具有还原性,与碱性铜试剂混合加热, 葡萄糖分子中的醛基被氧化成羧[suō] 基,而铜试剂中的二价铜被还原成砖红色的氧化亚铜沉淀。氧化亚铜可以使磷钼[mù]酸还原成钼蓝,使溶液成蓝色。其生成蓝色的深度与血滤液中葡萄糖浓度成正比。通过分光光度计比色,即可求出血糖的含量。
三实验器材
仪器:锥形瓶;试管及试管架;离心机;电炉;血糖管;奥氏吸管;分光光度计。
试剂:动物全血;1/3mol·L 硫酸溶液;碱性铜试剂;磷钼酸试剂;%苯甲酸溶液;·mL
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四实验步骤

吸取充分均匀的抗凝血1mL,擦净管外血液,缓慢放入锥形瓶或试管中。加入蒸馏水7mL,混匀,使完全溶血。·L 硫酸溶液1mL,充分混匀。此时血液由鲜红色变为棕色,静置5~10min,使其酸化完全。加入10%钨酸钠溶液1mL,边加边摇。当摇到不再产生泡沫时为止。说明蛋白质已经完全变性沉淀。放置5~10min,过滤或离心出去沉淀,既得无蛋白滤液(每毫升相当于1/10全血)
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2. 血糖测定
取3支血糖管按下表操作:
血糖管
空白管
标准管
测定管
无蛋白血滤液
蒸馏水
葡萄糖应用标准溶液
碱性铜试剂
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混匀,同时放