BN137菌株发酵产纳豆激酶的条件及酶的分离纯化、理化性质的研究.pdf

沈阳药科大学硕士学位论文摘要
酶促反应最适值是该酶在范围内稳定。
多种金属盐对纳豆激酶有保护作用,会使酶
严重失活。
纳豆激酶的活性不受和的干扰。
经原料药稳定性试验证明酶的冻干粉适宜在低温干燥的
条件下保存·
关键词纳豆激酶厂发酵分离纯化理化性质
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一


,












一
一
沈阳药科大学硕士学位论文英汉对照
英文缩写
丙烯酞胺
过硫酸按
,一
,一亚甲双丙烯酞胺
纳豆杆菌
牛血清白蛋白
牛纤维蛋白原
凝胶过滤层析
乙二胺四乙酸

高效液相色谱
离子交换层析
聚乙二醇
二烷基硫酸钠
一

聚丙烯酞胺凝胶电泳

四甲基氨基乙二胺
三轻甲基氨基甲烷
沈阳药科大学硕士学位论文第一章前言
第一章前言
血栓栓塞性疾病
血栓栓塞性疾病主要有三种冠状动脉疾病形成血
栓,主要指急性心肌梗死脑血管疾病形成血栓,
即脑血栓中风末梢动静脉疾病形成血栓,即脉管栓塞。
全世界有血管栓塞性病人约万,所需的溶栓剂的潜在市
场约。亿美元〔‘’。因而,溶栓剂的开发和研究始终是医药界
的关注焦点之一。
血栓的形成机制
纤维蛋白原在凝血酶的作用下生成纤维蛋白多肤和纤
维蛋白多肤两种蛋白多肤转化成纤维蛋白单体后
自发聚合成不稳定的纤维蛋白多聚体,不稳定的纤维蛋白多聚
体在、血浆中凝血因子姗的作用下交联成稳定的纤维蛋白
多聚体,这就是血栓的主要基质。基质罗集血小板及其他血细
胞,形成血栓,粘着、堵塞血管,阻滞血流。
血液中出现凝固的纤维蛋白块,该块状物再度溶解,使血
液再度恢复流动性的过程称为纤维蛋白溶解,简称纤溶作用。
凝血和纤溶作用在人体内不间断的进行,在正常生理状态
下,血浆凝血系统始终在活动,形成微量凝血酶,促使纤维蛋
白原变为纤维蛋白,沉着在血管内皮细胞上,对血管壁起着重
要的保护作用。与此同时,纤溶系统也在活动,形成纤溶酶,
降解纤维蛋白。两个系统保持动态平衡,防止血栓和出血现象
的发生,这就是止血平衡机理。血栓的发生是体内该平衡被打
破的结果〔’。
当代应用的溶栓剂〔”
随着溶栓剂的推广使用,血栓栓塞性病人的死亡率明显下
降。年,在第届欧洲心脏病学会代表大会上,就有专
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家指出溶栓是当前降低死亡率的唯一治疗方法。最近十
几年来,溶栓剂发展很快,根据溶栓剂的疗效及副作用大小,
可将溶栓剂分为代。
第一代溶栓剂的主要特征是无纤维蛋白特异性,副作用
大。易诱发全身纤溶亢进,并伴有严重出血症状。尿激酶
及链激酶是临床常上常
用的第一代溶栓剂。尿激酶的优点是无抗原性。缺点是选择性
差,治疗的同时会降解纤维蛋白原和、姗因子半衰期
较短,仅为分钟。链激酶虽然有效廉价,但它具有抗原性,
易引起变态反应,还可能出现低血压。
第二代溶栓剂的特点是具有一定程度的纤维蛋白特异性,
但半衰期较短,临床应用时需大剂量连续滴注,
此时仍可导致出血。第二代溶栓剂主要包括甲氧苯甲酞纤溶酶
原链激酶复合物人
、单链尿激酶型纤溶酶原激活剂
一、
组织型纤溶酶原激活剂
和一些具有较高纤溶能力的蛋白激酶和多
肤。第二代溶栓剂中副作用较大者属蛇毒制剂,临床使用后常
见出血并发症,头痛头晕,过敏等。
第三代溶栓剂是应用现代分子生物技术,对第一代第二代
溶栓剂进行改进,在特异性,半衰期及溶栓效率方面有较大的
提高的新型溶栓剂。主要包括突变体、嵌合体及导向溶栓剂。
为了解决第一、二代溶栓剂副作用大,半衰期短等特点。
研究人员除了致力于第三代溶栓剂的开发以外,同时也在寻找
天然的较具优势和发展前途的溶栓物质。日本纳豆激酶的发现
及南韩号菌株所产溶栓酶的发现说明这一途径具有广
阔的前景。
本课题相关内容
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纳豆激酶简称的发现
纳豆是日本深受喜爱的传统发酵食品,迄今己有千年的历
史。这种食品具有粘性聚果糖和聚谷氨酸风味成分,并且因为
发酵所采用的菌种及生产工艺的不同而品质各异。近年来纳豆
在日本被视为功能食品,广泛应用于防止一
些疾病的发生,如高血压高胆固醉血症
、小动脉坏死等
年,日本的须见洋行等人首次发现纳豆及其提取物在
体外具有溶解纤维蛋白的作用,随后证实内含具有纤溶活性的
一种蛋白酶,并定名为纳豆激酶〔‘’。
纳豆激酶的溶纤活性及作用原理
纳豆