红细胞试验.doc

实验安排
红细胞预处理
从兔血液中分离出红细胞，然后用生理盐水洗4 次，（1500rpm离心20 min）每次都将淡黄色物质吸去。最终，红细胞以20%的浓度重悬于PBS（150 mM NaCl， Na2HPO4， mM 实验安排
红细胞预处理
从兔血液中分离出红细胞，然后用生理盐水洗4 次，（1500rpm离心20 min）每次都将淡黄色物质吸去。最终，红细胞以20%的浓度重悬于PBS（150 mM NaCl， Na2HPO4， mM NaH2PO4,%柠檬酸钠,）中，4℃保存。用时取出混匀,再用PBS将红细胞稀释至需要浓度。
溶血实验
热损伤： mL 4% RBCs悬浮液， mL PBS，混匀，℃水浴，每组实验3个平行。
AAPH损伤： mL 6% RBCs悬浮液， mL ml 50mMAAPH（终浓度），混匀，将离心管置于37℃水浴，每组实验3个平行。
溶血率计算
红细胞损伤后，1500rpm离心20 min，取上清，测溶血率，
H(%)=（A/A100）×100
(A:上清液在波长540nm 处的吸光值；A100:红细胞-20℃冷冻后溶解使之完全溶血后在波长540 nm 处的吸光值)。
实验数据
红细胞预实验：
热损伤：水浴10、25、80 min。
AAPH损伤：30、90、180 min。
红细胞-20℃冷冻后溶解使之完全溶血
以上各样品准备3个平行，离心上清液一部分用分光光度计进行全波长扫描，另一部分用酶标仪测定570 nm 的OD值，比较确定使用哪种仪器。
红细胞损伤模型：
热损伤：水浴5、10、20、40、60、80 min。
AAPH损伤：30、60、90、120、150、180 min。
确定溶血率为50%（H50）损伤点。
确定保护剂剂量效应：
SOD蛋白最终浓度：100、250、500、1000、1500、2000、3000 U/ml；
阿米福汀最终浓度：、、1、2、4 µg/ml.
确定保护剂预作用时间效应：、1、2、3、6、12、18、24 h；