核苷类恩替卡韦卡介苗HBIG乙肝疫苗治慢性乙肝.doc

灭活卡介苗-乙肝免疫球蛋白-乙肝疫苗-核昔类四联疗法治疗慢
性乙肝的初步研究 徐兵吴林岚杨晓梅(福州市菁华崇辉医院)
Preliminary Study on Combined Treatment of Chronic Hepatiti〜24周后90%患者（共 57例）HBV-DNA转阴。从这57例患者中选36例为治疗组（从 HBV-DNA转阴后一个月开始用灭卡、HBIG、乙肝疫苗治疗，同时 按原方案ETV治疗）；其余21例只按原方案用ETV。
BCG冻干粉剂（）、HBIG （200U/支） 购自上海生物制品研究所；重组乙肝疫苗（10 pg/支）购自成都生物 制品研究所。灭活BCG：在BCG粉剂瓶中加入1ml生理盐水溶解，
将瓶密封置于65°C水浴中30min,为灭活BCG （灭卡，）。 四联治疗组： （）皮内注射，1 次/4周，共24周；HBIG 200IU/ml肌注1次/周,共24周；乙肝疫苗
（10 gg）肌注1次/周，共24周。三药联用24周为一疗程，期间继 续用恩替卡韦。疗程结束后1个月分别取患者血清查HBsAg、HBsAb、 HBeAg、HBeAb、HBcAb；取外周血单个核细胞（PBMC）体外培养, 用流式细胞术测定培养细胞表面DC标志（CD83、CDla、HLA-DR）。 单用ETV组：。
（PBMC）制备和培养 取各组患者肝素钠抗 凝（200U/ml）血加入等体积PBS稀释，按1:1体积比加到淋巴细胞 分离液上层，离心2000r/min, 20min,吸取中间白细胞层，用PBS混 悬，离心（1500r/min, lOmin）三次；用RPML1640培养基悬浮细胞, 调细胞浓度1 X 106/ml,接种于24孔培养板，在37。。, 5%CO2条件下 贴壁培养4ho
（DC）诱导培养 对照组（加入RPML1640完全培 养液 +106 PBMC）；活卡组（BCG 3Xl（）4cfu+106 PBMC）；灭卡组 （灭卡 3X104cfu+106PBMC）；细胞因子组（rhGM-CSF100ng/ml、
rhTNF- a 10 ng/ml、IL-4 50 ng/ml +106 PBMC）；活卡细胞因子组 （BCG 3 X 104cfu+106 PBMC+与细胞因子组等量细胞因子）；灭卡细 胞因子组（灭卡
3X104cfu+106PBMC+与细胞因子组等量细胞因子）； 各组均在37°C, 5%CO2条件下培养，每2天半量换液及全量补充细 胞因子、活卡或灭卡。
DC免疫标志测定 取培养9天细胞，用PBS调细胞浓度IX 106/mL加入离心管，每管100/1，分别加入FITC荧光标记单抗（CD83、 CDla、HLA-DR）各 20/1，4°C避光静置 30min, PBS 洗涤 2 次，以 FITC荧光标记鼠抗人IgGl作阴性对照,用流式细胞仪测阳性细胞数。 用统计软件SPSS （）分析，计量数据以均数 土标准差（？土S）表示，两组均值比较用，检验；两因素实验数据比较 用B检验和LSD-f检验；百分率比较用x2检验。均以P<0