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脐带血造血干细胞扩增技术研究进展
 
 
摘要：自从1988年运用脐带血移植治愈了Fanconi患者以来，便开始了脐血的研究，脐带血已经广泛应用于临床，体外进行脐带血造血干细胞(CBHSCs)的扩增可以产生数量较多的细胞，解决助细胞对CD34+细胞的扩增不会造成影响，与CFU-GM一起的CD34+细胞扩增能力会增加3倍。CBCD34+细胞纯化是必须的，但并不是纯度越高越好，纯化如果适度会减少标本的体积，保留了一部分淋巴细胞和单核细胞，会增加CD34+细胞的扩增能力。


很多基质细胞系会用来进行早期造血调控机制的研究，具有体外扩增的能力。如果在临床上应用体外扩增细胞，这些基质细胞可能会受到微生物的感染，会引发传染性疾病，所以寻找新的基质细胞是非常重要的。KohlerT等研究了脐静脉内皮细胞和骨髓基质细胞对CBHSCs扩增的作用，分析了扩增后CD34+细胞、CD34+/CD38-细胞亚群的比例。BMSC的的添加会促进CD34+细胞的增殖，说明体外CD34+细胞的扩增受到BMSC的协助。产生这种差异的原因是骨髓基质结构支持HSCs的生长。基质细胞会产生一些细胞因子和基质支持HSCs体外扩增。
骨髓间充质干细胞会提供一个适合细胞因子、胞外基质和粘附分子附着的造血微环境，在此微环境下，更有利于干细胞的增殖，同时其可以分泌白细胞介素，巨噬细胞集落刺激因子和干细胞因子支持骨髓LTC-Ics的生长。脐血MSCs进行体外扩增，MSCs会对CD34+细胞产生影响，使得CD34+表面形成的CD34+/CD38-/HLA-DR-高于单细胞因子，且MSCs存在条件下，扩增后的CD34+细胞会保持自身原有的状态。
如果一个培养体系有助于人造血细胞体外生长，那么该培养体系中一般含有基质细胞，但有关实验也证明无基质细胞的培养体系也对CBMSCs体外扩增有促进作用。如果将其应用于临床，无基质培养体系会简化培养过程，减少细菌污染的机率，减轻患者病经济负担。

血清是天然培养基，营养丰富，可以促进细胞的生长与繁殖，目前最常用的是小牛血清。如果在临床上使用含有异源血清的培养体系扩增的细胞，则容易会引起污染。于是人们开始尝试用人体血浆来替代异源血清和无血清培养体系。
CB血浆与人体血浆相比，CD34+细胞的扩增能力更强，CB血浆中含有较高水平的细胞因子，会激活休眠细胞。有研究表明，若培养体系中含有CB血浆，细胞的扩增效率会增加，而其中CD34+细胞与CD34+/CD38-细胞数量却会明显降低。如果将该培养体系用于临床细胞培养，所培养细胞会产生一些抗血清成份，将该培养基扩增的细胞输入受体，会引起免疫排异反应；如果培养体系不含血清，可能会更适用于临床。无血清培养基QBSF-60支持CFCs细胞的扩增，也支持CBMSCs细胞的体外扩增，也可以用于体外扩增CBMSCs细胞。

对CBMSCs进行体外扩增，则在其培养体系中必须加入相应的细胞因子。细胞因子会使造血干细胞发生特异性分化，从而用于不同的临床需求，发挥相应的生物学功能，同时，在细胞因子对辅助细胞的扩增也会发挥有益作用。单纯使用细胞因子的加入对细胞进行体外扩增，其扩增能力会受到限制，细胞扩增1周可能会失去重建造血功能的能力，所以，现在的大多数培养体