样品中地塞米松磷酸钠残留检测方法(SEC.docx

XXXX中地塞米松磷酸钠残留检测方法（SECHPLC法）
开发报告
部门
分析研究部
文件类别
技术标准文件
部门
分析研究部
起草人
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审核人
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审核人
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生效日期
年 、流速设置如下：
流动相：[ mol/L PB+ mol/L 硫酸钠()]:乙腈=90:10
检测波长： 242nm
流速：
，地塞米松磷酸钠出峰时间 大约在32min,所以检测时间设置为40min, XXX的蛋白和地塞米松磷酸钠的分 离效果都良好，说明该方法具有可行性，且以上参数均适用于该方法。
接下来就对该方法进行初步验证。根据《中国药典》2015 年版第三部，技 术指南 9101 药品质量标准分析方法验证指导原则的要求，对该方法进行专属性、 准确度、线性、检出限、定量限验证。以确定该方法各项验证指标均达到预期的 可接受标准，方法稳定、可靠，可用于 XXX 地塞米松磷酸钠残留检测。
验证过程
接入流动相，冲洗色谱系统
用超纯水冲洗 HPLC 的管路，将管路中保存液置换出，再用流动相将所用 管路中的超纯水置换出。
色谱柱平衡
接上色谱柱，用流动相平衡柱子，，直至基线平直。
编辑方法并调用
编辑方法，设置流速，温度，检测波长，时间等参数。并在序列中调用方 法。方法设置：
•流速：
• 柱温：不控温
• 检测波长： 242nm
• 时间： 40min
样品检测
将制备好的地塞米松磷酸钠样品加入进样瓶，放入样品托盘中，并将位置 号编入序列表中，上样体积为30卩1，运行序列，检测完成后，依据恰当的积分 参数，可获得主峰（地塞米松磷酸钠峰）峰面积、保留时间等。（样品制备过程 中使用的稀释液为流动相）。
结果计算
回收率结果计算中，将待测样品的地塞米松磷酸钠峰面积代入线性方程计 算待测样品实际上样量，用实际上样量与理论添加量之比即可计算回收率。
正式检测样品时，采用单点外标，需检测两次标准物质地塞米松磷酸钠对 照品溶液，记录两次结果的地塞米松磷酸钠的峰面积。按以下公式计算。
公式：待测样品地塞米松磷酸钠残留 MX=（MR*AX）/AR
式中 MX为待测样品的地塞米松磷酸钠残留量（ng）
Mr为对照品的地塞米松磷酸钠上样量（ng）
AX为待测样品的平均峰面积（微伏*秒）
Ar为对照品的平均峰面积（微伏*秒）
验证项目：
专属性
取 XXX 纯化工艺中间样品缓冲液：Protein A Elution buffer、QFF Elution buffer、 HIC E1ution buffer、 10mmo1/L Tris ， 进行检测，比较色谱 图，结果如下图（从上到下依次是：地塞米松磷酸钠、 10mmol/l Tris、 HIC Elution Buffer、
QFF Elution Buffer、 Protein A Elution Buffer）：






h
I1





U











-

分钟
图 1 ：纯化工艺中间样品缓冲液
结果分析：
Protein A Elution Buffer在14min左右出的峰是柠檬酸，这四种缓冲液在地 塞米松磷酸钠出峰的位置均无明显峰出现，说明这四种缓冲液对地塞米松磷酸 钠的峰不会产生干扰。
：XXX的缓冲液对地塞米松磷酸钠结果的计算和判断 无明显影响，专属性验证合格。

、 ng/yl、 ng/yl、
ng/yl、 ng/yl，，每个浓度各检测两次。结果如下表:
表 1：线性结果
地塞米松磷酸钠 上样量（ng）
主峰峰面积 （微伏*秒）
主峰峰面积