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微生物实验报告
微生物的生理生化实验
侯汶青 201300140031 组别：周四下午五组
同组者：李璇、李倩茜 实验完成时间：2014年 12 月6号
一、实验目的
1、证明不同微生物对各种有机大分子物质的水解能力不同，从而说明一个生物化学检测的指标。
色氨酸水解反应：
XX——c—CH2CHNH2COOH
+ HQ -
吲哚与对二甲基氨基苯甲醛反应：
色氨酸
大肠杆菌吲哚反应阳性，产气肠杆菌为阴性。
5、甲基红实验： 甲基红实验是用来检测由葡萄糖产生的有机酸，如甲酸、乙酸、乳酸等。当 细菌代谢糖产生酸时，培养基就会变酸，使加入培养基中的甲基红指示剂由橙黄 色（）转变为红色（）,即甲基红反应。尽管所有的肠道微生物都能 发酵葡萄糖产生有机酸，但这个试验在区分大肠杆菌和产气肠杆菌上仍然是有价 值的。这两个细菌在培养的早期均产生有机酸，但大肠杆菌在培养后期仍能维持 酸性pH4，而产气肠杆菌则转化有机酸为非酸性末端产物，如乙醇、丙酮酸等， 使 pH 升至大约 6，因此，大肠杆菌为阳性，产气肠杆菌为阴性。
丙酮酸一实乙酰乳酸亠旦乙酰甲基甲醇岀2, 3-丁二醇
CH3
+ 2H2O
ch3
乙酰甲基甲醇
二乙酰
红色化合物
四、实验步骤
（一）培养基的合成、灭菌及准备无菌操作台
1、淀粉培养基（制备固体平板，每组 2 个平板）:
换算-一称量-一先将淀粉溶解再溶解其它成分-一调pH值---装入500毫升三 角瓶中---加棉塞---包扎---待灭菌。
2、油脂培养基（制备固体平板，每组 2个平板）： 换算-一称量-一油和琼脂及水先加热-一调好pH后再加入中性红---装入500 毫升三角瓶中---加棉塞---包扎---待灭菌。
3、 葡萄糖发酵培养基（液体培养基，每组5支试管）：
换算---称量---溶解---调 pH 值---加溴甲酚紫指示剂---分装小试管 30 支 ---加棉塞---包扎---待灭菌。
4、 乳糖发酵培养基（液体培养基，每组5支试管）：
换算-一称量一-溶解-一调pH值---加溴甲酚紫指示剂-一分装小试管30支并 加入灌满培养基的德汉氏小管---加棉塞---包扎---待灭菌。
5、 蛋白胨水培养基（液体培养基，每组5支试管）:
换算---称量---溶解---调 pH 值---分装大试管 30 支---加棉塞---包扎--- 待灭菌。
6、 葡萄糖蛋白胨水培养基（液体培养基，每组5支试管）:
换算---称量---溶解---调 pH 值---分装大试管 30 支---加棉塞---包扎--- 待灭菌。
7、 灭菌： 将所有包扎好的含有培养基的试管和培养皿放入灭菌锅中进行灭菌。
8、准备无菌操作台： 将无菌操作台的电源打开，通入无菌风并打开紫外灯进行灭菌准备工作，紫
外灯约照射20min,并且关闭两侧的玻璃门。20min后，关闭紫外灯，打开日关 灯，放入酒精灯并点燃，准备进行实验操作。
（二）倒平板、接种、培养及观察分析

1．淀粉水解试验
（1）固体淀粉培养基灭菌后取出，待培养基冷却至50°C左右，无菌操作制 成平板，冷却凝固并倒置。
（2）用记号笔在平板底部划成四部分。
（3）无菌操作台上，在酒精灯旁无菌操作用接种环将枯草芽孢杆菌、大肠杆 菌、变形杆菌和铜绿假单胞菌分别在平板的不同部分进行点种（如下图所示）， 尽量接种面积要小，而且注意在平板的反面的对应部分分别写上菌名进行标记， 以防弄混。
（5）两天后，观察平板上不同区的各种细菌的生长情况，打开平板盖子，滴 入少量卢戈氏碘液于平板中，轻轻旋转平板，使碘液均匀铺满整个平板，然后观 察菌苔颜色变化。如若菌苔周围出现无色透明圈，说明淀粉已被水解，细菌为阳 性，否则细菌为阴性。而且透明圈的大小可用来初步判断该菌水解淀粉能力的强 弱，即产生胞外淀粉酶活力的高低（以 “+”、“—”表示有无透明圈）。 2．油脂水解试验
（1）固体油脂培养基灭菌后取出，待培养基冷却至50°C左右，无菌操作制 成平板，冷却凝固并倒置。
（ 2）用记号笔在在平板底部划成四部分，并且分别在四部分上标记菌种名 称，以防弄混。
（ 3）无菌操作台上，在酒精灯旁无菌操作用接种环将枯草芽孢杆菌、大肠 杆菌、变形杆菌和铜绿假单胞菌分别划十字线（如下图所示）接种于平板相对应 部分的中心，可以让接种面积大一些，但是不要太大。
（5）两天后，取出平板，加入中性红试剂，观察菌苔颜色。如果出现红斑 点，说明脂肪水解，为阳性反应。
（葡萄糖和乳糖两种培养基）
（1） 液体培养基灭菌后取出，用记号笔在各试管外壁上分别标明发酵培养 基的名称或者在试管上