头孢氨苄残留荧光免疫层析检测试纸条及其制备方法.docx

头孢氨苄残留荧光免疫层析检测试纸条及其制备方法
头孢氨苄残留荧光免疫层析检测试纸条及其制备方法
本发明公开了一种快速、灵敏、操作简便的头孢氨苄残留量的荧光免疫层析检测试纸条及其制备，该试纸条包括在底衬上顺次相互搭接地粘贴样品垫、结合垫、，4分钟)后，悬浮于100 μ L碳酸盐缓冲液中。1500r/min离心I分钟，去除杂质，放置在4 °C备标记抗体之用。
[0018]:
[0019]°C透析过夜，与上述醛基化的荧光纳米颗粒混合，4°C反应过夜。然后，加入硼氰化钠，终浓度为5mM，4°C反应2-4小时。再加入等体积的封闭液(50mM tris-，含2% BSA、4%蔗糖)，封闭12小时或过夜；最后用50mM tris-HCl (12000r/min，4分钟，4°C )，然后用100 μ L50mM tris-HCl (含 % NaCl、% BSA、% Tween-20)悬浮，4°C避光储存备用。
[0020]:
[0021] Tris-HCl (), % TritonX-100，% BSA的处理液中，于4°C条件下浸泡2小时；然后于37°C下烘干2小时，备用。再将玻璃纤维膜切成IOmm的宽度，然后在Bio-DotXYZ3050三维喷点平台上，用Bio-Jet Quanti300非接触式微定量喷头喷到玻璃纤维膜，在37°C下烘干I小时，备用。
[0022]:
[0023]所述检测线为头孢氨苄与卵清蛋白(OVA)制得的包被抗原；将头孢氨苄和卵清蛋白(OVA)，采用戊二醛法进行偶联得到包被抗原。取头孢氨苄IOmg溶于5mL PBS (，)中，加入I %戊二醛溶液搅拌30分钟，取0VA30mg溶于ImL PBS，加入到活化的头孢氨苄溶液中，25°C搅拌反应2小时，4°C反应过夜。4°C条件下，用PBS透析3天，得到头孢氨苄包被抗原，分装冻存。羊抗BALB/C小鼠免疫球蛋白抗体(羊抗鼠IgG)是用BALB/C小鼠的免疫球蛋白作为抗原，免疫羊，提取免疫羊血清中的抗体球蛋白制成。分别用包被稀释液将头孢氨苄-卵清蛋白包被抗原和羊抗BALB/-，膜液量为25 μ L/25-30cm，将它们分别作为检测线和质控线平行喷洒于硝酸纤维素膜上进行包被，检测线和质控线间隔4-7mm，然后于37°C下烘干2小时，封袋，以备试纸背板贴板之用。[0024]、涂覆有荧光标记抗体的结合垫、包被有检测线和质控线的硝酸纤维素膜和吸水垫，得到试纸条，按照要求切割为4mm宽，与干燥剂一起密封备用。
[0025]本发明还提供一种利用所述的头孢氨苄残留荧光免疫层析检测试纸条检测头孢氨苄残留的方法，包括以下步骤:
[0026](I)样品前处理:牛奶样品离心(12000r/min，IOmin)脱脂后直接测定；
[0027](2)用试纸条检测:在试纸条的上样点直接滴加上述离心脱脂