高效液相色谱法(新.ppt

第10章 高效液相色谱法
HPLC概述
HPLC分类与基本原理
各类高效液相色谱法
固定相
流动相
高效液相色谱仪
定性、定量分析方法
应用极性大的组分后出峰。
反相液-液色谱法：极性：流动相＞固定相。极性大的组分先出峰、极性小的组分后出峰。
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各类高效液相色谱法 化学键合相色谱法
将固定液的官能团键合在载体的表面就构成了化学键合相，以此为固定相的色谱法称为化学键合相色谱法(bonded phase chromatography，BPC)。
化学键合相既有分配作用，又有吸附作用，应用广泛
硅胶内部
十八烷基硅烷
键合相 ODS
硅胶表面
硅胶内部
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各类高效液相色谱法 化学键合相色谱法
正相键合相色谱法
反相键合相色谱法
离子对色谱法
离子抑制色谱法
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各类高效液相色谱法 化学键合相色谱法
正相键合相色谱法
固定相：极性大的化学键合相，如氰基、氨基化学键合相；流动相：极性小的烷烃(正己烷)加适量极性调整剂构成。
分离机理 主要靠范德华力(定向、诱导)或氢键作用力的差别而分离。
流动相的极性与容量因子的关系 流动相极性增大，洗脱能力增加，k减小、tR减小。
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各类高效液相色谱法 化学键合相色谱法
反相键合相色谱法 RBPC
典型的RBPC：非极性键合固定相＋极性流动相组成。固定相：ODS；流动相：甲醇-水，乙腈-水。非典型RBPC：弱极性或中等极性键合相＋极性大于固定相的流动相组成。
分离机理 疏溶剂理论、双保留理论、顶替吸附-液相相互作用模型等。
流动相的极性与容量因子的关系 流动相的极性增大，对组分的洗脱能力降低， k增大、tR增大；反之， k减小、tR减小。
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各类高效液相色谱法 化学键合相色谱法
离子对色谱法 有正相、反相之分，常用反相的。
反相离子对色谱法：由于离子型化合物在非极性固定相中的溶解度很小，几乎没有保留作用。为此，加入与其带相反电荷的离子对试剂，生成不荷电的中性离子对，而中性离子对在非极性固定相中的溶解度大大增加，分配系数增大，分离效果明显得到改善。这种方法被称为反相离子对色谱法。
实现方法：用ODS柱，在流动相甲醇-水或乙腈-~。
离子对试剂 PIC价格较贵
分离碱类-烷基磺酸盐；分离酸-四丁基季铵盐。
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各类高效液相色谱法 化学键合相色谱法
离子对色谱法
分离机理 以分离碱类为例
分配系数 其K除与RHPLC有相同的影响规律外，还与PIC试剂的碳链长度有关，链增长K增大。
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各类高效液相色谱法 化学键合相色谱法
离子抑制色谱法
弱酸、弱碱组分容易解离，在非极性固定相中的溶解性很差，可通过调节流动相pH来抑制它们的解离，使之以分子的形式存在，从而增加它在固定相中的溶解度，增加保留作用，以达到分离目的。
适用范围 pKa：3~7的弱酸，7~8的弱碱
抑制剂 乙酸、甲酸、氨水、磷酸盐、乙酸盐等。
容量因子及其影响因素 除与RHPLC有相同影响因素外，主要受流动相pH的影响。对于弱酸，流动相的pH＜pKa时，抑制解离，k增大、tR增大；流动相的pH＞pKa时，利于解离，k减小、tR减小。对于弱碱，情况相反。
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离子色谱法
手性色谱法
环糊精色谱法
胶束色谱法
亲和色谱
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固定相
液-固色谱固定相
化学键合相
其他固定相
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固定相 液-固色谱固定相
硅胶：无定形全多孔硅胶、球形全多孔硅胶、堆积硅珠、灌注微粒硅胶、硅-碳杂化硅胶、硅聚合物薄膜型硅胶。
高分子多孔微球：有机胶，由苯乙烯与二乙烯苯交联而成。分离机理主要为吸附作用，兼有分配及空间排阻作用，其表面为芳烃官能团(非极性)，流动相为极性溶剂，相当于反相洗脱。
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