puc57图谱简图.pdf

PUC57 有氨苄抗性，MCS 在 lacZ 基因里面插入基因后可通过蓝白筛选挑选阳性克隆。
如何阅读质粒图谱
第一步：首先看 Ori 的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒）
第二步：再看筛选标记，如抗性，决定PUC57 有氨苄抗性，MCS 在 lacZ 基因里面插入基因后可通过蓝白筛选挑选阳性克隆。
如何阅读质粒图谱
第一步：首先看 Ori 的位置，了解质粒的类型（原核/真核/穿梭质粒）
第二步：再看筛选标记，如抗性，决定使用什么筛选标记。
（1）Ampr 水解 β－内酰胺环，解除氨苄的毒性。
（2）tetr 可以阻止四环素进入细胞。
（3）camr 生成氯霉素羟乙酰基衍生物，使之失去毒性。
（4）neor（kanr） 氨基糖苷磷酸转移酶 使 G418（卡那霉素衍生物）失活
（5）hygr 使潮霉素 β 失活。
第三步：看多克隆位点（MCS）。它具有多个限制酶的单一切点。便于外源基因的
插入。如果在这些位点外有外源基因的插入，会导致某种标志基因的失活，而便于
筛选。决定能能不 放目的基因以及如何放置目的基因。
第四步：再看外源 DNA 插入片段大小。质粒一般只能容纳小于 10Kb 的外源 DNA
片段。一般来说，外源 DNA 片段越长，越难插入，越不稳定，转化效率越低。
第五步：是否含有表达系统元件，即启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终
止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体，还是要以实验目的为准绳。
启动子－核糖体结合位点－克隆位点－转录终止信号
启动子－促进 DNA 转录的 DNA 顺序，这个 DNA 区域常在基因或操纵子编码顺序
的上游，是 DNA 分子上可以与 RNApol 特异性结合并使之开始转录的部位，但启动
子本身不被转录。
增强子/沉默子－为真核基因组（包括真核病毒基因组）中的一种具有增强邻近基
因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向无关。即在所调控基因
上游或下游均可发挥作用。/沉默子－负增强子，负调控序列。
核糖体结合位点/起始密码/SD 序列（Rbs/