一种葡萄糖的比色检测方法.docx

一种葡萄糖的比色检测方法
一种葡萄糖的比色检测方法
本发明公开了一种葡萄糖的比色检测方法，是将样品经预处理、加缓冲液稀释后与葡萄糖氧化酶混合，反应生成过氧化氢，然后加入二硫化钼溶液、显色剂和缓冲液，混合反应后，采用目视比色法或紫外-可见的，本发明采用如下技术方案:
一种葡萄糖的比色检测方法，是将样品经预处理，加缓冲液稀释后与葡萄糖氧化酶混合，反应生成过氧化氢，然后加入二硫化钥溶液、显色剂和缓冲液进行显色反应，采用目视比色法，将反应后的溶液颜色与比色标准系列进行比较，或在显色反应后加入硫酸溶液终止反应，再采用目视比色法半定量测定葡萄糖的浓度。
[0005]所述比色标准系列的制备是将葡萄糖标准品加缓冲液稀释，配制成已知的不同浓度的葡萄糖标准溶液与葡萄糖氧化酶混合反应后，加入二硫化钥溶液、显色剂和缓冲液进行显色反应即得比色标准系列，或在显色反应后加入硫酸溶液终止反应得到比色标准系列。
[0006]一种葡萄糖的比色检测方法，是将样品经预处理，加缓冲液稀释后与葡萄糖氧化酶混合，反应生成过氧化氢，然后加入二硫化钥溶液、显色剂和缓冲液，显色反应后采用紫外-可见分光光度计测定溶液的吸光度，或在显色反应后加入硫酸溶液终止反应，再采用紫外-可见分光光度计测定溶液的吸光度，并根据标准曲线方程计算葡萄糖的含量。
[0007]所述标准曲线方程的建立是将葡萄糖标准品加缓冲液稀释，配制成已知的不同浓度的葡萄糖标准溶液与葡萄糖氧化酶混合反应后，加入二硫化钥溶液、显色剂和缓冲液，显色反应后采用紫外-可见分光光度计测定在652 nm波长处的吸光度，或在显色反应后加入硫酸溶液终止反应，再采用紫外-可见分光光度计在450 nm波长处测定吸光度，并以吸光度作为纵坐标，葡萄糖的浓度作为横坐标，绘制标准曲线并得出标准曲线方程。
[0008]稀释样品和葡萄糖标准品所用缓冲液的pH值为3-9。
[0009]显色反应中所用缓冲液的pH值为1-9。
[0010]显色反应的温度为30?60 °C。
[0011]所用的显色剂为3，3’，5，5’ -四甲基联苯胺、2，2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐或邻苯二胺。
[0012]本发明的显著优点是:
(I)本发明通过葡萄糖氧化酶氧化葡萄糖生成过氧化氢，再由二硫化钥催化显色剂与过氧化氢反应产生颜色变化，以指示葡萄糖的不同浓度。葡萄糖浓度不同，则溶液颜色及颜色深浅均不同；通过肉眼观察即可判断葡萄糖是否超标，而不必借助任何仪器，因此检测成本低，操作简便。
[0013](2)本发明所使用的二硫化钥无需修饰即可用于葡萄糖的检测。
[0014](3)本发明中分光光度法检测葡萄糖的检测限可以达到I PM，线性范围为5 UM到 150 uM (R2=)。
[0015](4)本发明的反应条件温和，检测速度快，重现性好，且无需昂贵的检测仪器，操作简便，可实现葡萄糖的可视化快速识别和检测。【具体实施方式】
[0016]标准葡萄糖溶液的检测:将20 μ L葡萄糖氧化酶溶液与180 μ L用缓冲液(pH3-9)配制的不同浓度的葡萄糖溶液混合,3(T60°C下反应30 min, mL的二硫化钥溶液、 mL缓冲溶液(pH 1_9)，混匀，放置30 min后，利用目视比色法进行半定量