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一种用斑马鱼对药物功效的评价方法
一种用斑马鱼对药物功效的评价方法
本发明公开了一种为斑马鱼应用于中药安全性评价和鱼类生理学的研究提供基础资料的药物功效评价方法，包括如下步骤，1)、试验材料的准备：a）、药品，b）、实验仪器，c）、实验含量=c*50/1000
其中，c为通过乳酸含量的标准曲线计算得出的匀浆稀释液乳酸浓度，计算后绘制出各浓度试验的乳酸含量标准曲线图。
[0007]i)、实验鱼的乳酸脱氢酶的测定，上步操作制得的斑马鱼生理盐水匀浆液，离心取上清液，稀释20倍，用乳酸脱氢酶测定试剂盒按步骤加样，反应15min，用酶标仪在450nm波长时测其吸光度；并通过换算出每个浓度试验中乳酸脱氢酶的浓度，制作各个浓度试验中乳酸脱氢酶浓度的标准曲线。
[0008]j)、统计分析，采用单因素方差分析及多重比较分析不同浓度处理造成的差异。
[0009]优选的，。
[0010]本发明的有益效果是:通过本发明，证明斑马鱼应用于中药药物筛选安全性评价是可行的，本研究可为斑马鱼应用于中药安全性评价和鱼类生理学的研究提供基础资料。
【专利附图】
【附图说明】
[0011]图1为本发明一一种用斑马鱼对药物功效的评价方法的不同浓度红景天溶液处理5天对斑马鱼窒息时间的影响曲线图。
[0012]图2为本发明一一种用斑马鱼对药物功效的评价方法的不同浓度红景天溶液处理5天对斑马鱼缺氧窒息后体内乳酸含量的标准曲线图。
[0013]图3为本发明一一种用斑马鱼对药物功效的评价方法的不同浓度红景天溶液处理5天对斑马鱼缺氧窒息后体内乳酸含量的影响曲线图。
[0014]图4为本发明一一种用斑马鱼对药物功效的评价方法的不同浓度红景天溶液处理5天对斑马鱼缺氧窒息后体内乳酸脱氢酶活性的影响曲线图。
【具体实施方式】
[0015]下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明:
一种用斑马鱼对药物功效的评价方法，包括如下步骤:
一、试验材料的准备:
1、药品:由三普药业股份有限公司销售三普红景天胶囊。由南京建成生物工程研究所销售的乳酸测定试剂盒、乳酸脱氢酶试剂盒。
[0016]2、实验仪器:可见光分光光度计,酶标仪。
[0017]3、实验用鱼:以购自广东的斑马鱼作为实验鱼，首先进行为期4周的驯养实验，以江门市蓬江区海豚水族有限公司生产的海豚热带鱼粮微颗粒为饵料，培养在水温25°C，,光制为12:12的环境中。
[0018]二、试验方法:
1、设置6个处理实验的红景天浓度梯度各为Omg/L、、、、
/L，各处理实验的实验鱼数量为20条；
2、实验前，斑马鱼禁食24h以排除消化过程差异，然后随机选取实验鱼()分配到各处理组；
3、红景天水溶液置于IL玻璃烧杯中，然后于恒温25°C水浴控制温度，采用小型气泵充氧，往水体中放入实验鱼后立即以塑料筛网罩住烧杯杯口 ；
4、药物处理结束后，小心移出斑马鱼，移出后的斑马鱼逐个放入预先注入恒温养殖水的25mL小口玻璃瓶中，充满水后，用塑料筛网罩住玻璃瓶口，放入恒温水浴，适应lOmin，使实验鱼恢复平静；
5、用小塑料