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重组蛋白纯化的基本策略
作者：佚名    实验频道来源：本站原创    点击数： 1241    更新时间：2004-12-21
及的具体步骤最终取决于样品的性质。但也有共同可参考的阶段
  捕获阶段：目标是澄清重组蛋白纯化的基本策略
作者：佚名    实验频道来源：本站原创    点击数： 1241    更新时间：2004-12-21
及的具体步骤最终取决于样品的性质。但也有共同可参考的阶段
  捕获阶段：目标是澄清、浓缩和稳定目标蛋白。
  中度纯化阶段：目标是除去大多数大量杂质，如其它蛋白、核酸、内毒素和病毒等。
  精制阶段：除去残余的痕量杂质和必须去除的杂质。
 
分离方法的选择
    根据蛋白质的特殊性质采用不同的分离方法：
蛋白质的性质
方法
电荷（等电点）
离子交换（IEX）
分子量
凝胶过滤（GF）
疏水性
疏水（HIC）反相（RPC）
特异性结合
亲和（AC）
　
　
　
　
　
    每一种方法都有分辨率、处理量、速度和回收率之间的平衡。
    分辨率：由选择的方法和层析介质生成窄峰的能力来实现。总的来说，当杂质和目标蛋白性质相似时，在纯化的最后阶段分辨率是重要因素。
    处理量：一般指在纯化过程中目标蛋白的上样量。如上样体积、浓度等。
    速度：在初纯化中是重要因素，此时杂质如蛋白酶必须尽快除去。
    回收率：随着纯化的进行渐趋重要，因为纯化产物的价值在增加。
 
    在三阶段纯化策略中每一种方法的适用性见下表：
技术
主要特点
捕获
中度纯化
精制
样品起始状态
样品最终状态
IEX
高分辨率
高容量
高速度
★★★
★★★
★★★
低离子强度
样品体积不限
高离子强度或pH改变。
样品浓缩
HIC
分辨率好
容量好
高速度
★★
★★★
★
高离子强度
样品体积不限
低离子强度
样品浓缩
AC
高分辨率
高容量
高速度
★★★
★★★
★★
结合条件特殊
样品体积不限
洗脱条件特殊
样品浓缩
GF
高分辨率
（使用Supedex）
 
★
★★★
样品体积（<总柱体积的5%）和流速范围有限制
缓冲液更换（如果需要）
样品稀释